HIF-1慢病毒转染大鼠MSC 求助~

wangbiao915

我用的是invitrogen plenti6.3慢病毒,在包装空病毒和含有HIF-1基因的病毒时候293细胞都能看到荧光，但是早转染大鼠的MSC时，空慢病毒和含HIF-1基因的慢病毒同时转染MSC24小时后换液，48小时候空病毒有强烈的荧光，而HIF的却没有一点荧光，72小时后HIF-1病毒还是没有荧光，转的条件都是一样的，为什么HIF-1的却转染不进去，求各位指点一下啊~    因为这是实验的第一步，HIF-1转不进去实验就没办法进行下去，明年就要毕业了，很急，求哪位给点意见和方法~   

akxiaoqiang

HIF-1基因慢病毒载体可能太大了，包装效率低？》》》可能么？

wangbiao915

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; S8 O) h' `) }% u8 y8 F2 E
但是在包装病毒时候293细胞荧光很强烈的，而转染MSC时候就一点荧光也没有    插入的HIF-1基因是2483bp，不能转载这么大的吗？

wangbiao915

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' a3 @% F4 ~& [. r; Q8 M2 ~我在包装HIF1病毒时候的293荧光也很强烈的，这能不能说明我包装出来的HIF-1病毒是没问题呢？   我现在是将HIF-病毒感染大鼠MSC时候看不到一点荧光，而空病毒感染MSC时候荧光表达率也有90%左右

刘森泉

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' j5 m$ y- N3 f* E2 B
; P) J- I0 F" d用HIF病毒感染293试试。因为第一天的荧光是质粒表达蛋白发出的，不能说明你这个质粒包装出病毒了。

wangbiao915

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1 d7 e& x3 a% j包转病毒时候的293细胞有荧光不能说明已经包装出HIF-1慢病毒？

刘森泉

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' V. ~' b1 h' M+ J* C. r% ~) p% x把质粒转染进293细胞，第二天在293细胞里看到了荧光，那是质粒表达的蛋白发出的荧光，不能说明病毒包装成功。

刘森泉

回复 wangbiao915 的帖子* C% M' Z) v  e# B! f

5 q% Z- C+ K- K只有收了病毒，感染细胞后发出的荧光才是病毒重组基因组后表达的蛋白。