关于跨膜分泌蛋白的融合过表达

runsong

如题，我想将此类蛋白与GFP 融合表达，可以用什么常规载体，构建时有什么原则吗？

风雪叶杰

感觉这种融合表达会产生问题，因为GFP说实话并不小，对蛋白的折叠会有影响，而且融合蛋白过大也会增加分泌的难度吧？个人意见，仅供参考

weiyepan

融合荧光蛋白为什么要分泌出去啊？楼主是想要什么样的实验效果呢？又不是细胞定位。如果只是看表达筛选的话不如用个化学发光的标签，比如Gluc，seAP之类的。: ]3 ]  z+ m% s
我们倒是有两个载体是上面两个蛋白双分泌的，就是不知道你做什么用合不合适。
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runsong

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& o9 g! j! S7 {3 D; L% c6 G$ E我要研究的蛋白就是分泌蛋白

weiyepan

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# L/ T( t: n* y% l" Y# g! M* U: [1 e% O- z( k) j
据我所知分泌蛋白都是有信号肽的，不知道你所做的是野生型分泌的还是要融合信号肽分泌出去。
/ w2 c0 Q9 h8 \0 D正如2楼所说的，GFP的结构很强，会影响蛋白折叠的可能性也很大，不止是融合蛋白，就连用IRES表达的GFP，对前后的蛋白表达量都有一定的影响的。如果你只是做几个，那么可以试一下，如果是做screen的话，出入就比较大了，结果不一定可信。