我的骨髓间充质干细胞怎么纯化不了呢？？有图片

imgaga

# R* R' v1 ]5 Q% o% Y( E0 w* C, m9 m8 C/ r+ t
这张图有两种细胞，一种是颜色浅的，应该是骨髓间充质干细胞吧？一种是图片里颜色深点的，小点的细胞，是什么细胞呀？这两种细胞贴壁都很牢，也吹打不下来，我消化了5分钟。这样的话，细胞该怎么纯化呀？
7 B$ b7 K( z( l1 s: K3 j1 y我养原代的时候，好像是5天首次换液，是不是时间长了，贴壁的细胞就不纯了？

Tonypan

可以做个流式，检测一下CD45和CD14表达。看看是不是单核巨噬细胞或者其他白细胞的污染。

wangfw

采用克隆杯法，在皿中找一处细胞生长较好，没有其他类型细胞地方，进行局部消化可达到纯化目的。

wangzhiqi86

采用Percoll或Ficoll淋巴分离液会好很多，混合液3000rmp离心30min后，吸取中间薄雾层，在加有α-MEM+10%FBS的培养瓶中培养，3-4天时首次换液，然后每2-3天更换一次培养基，一般两周左右能分离到比较纯的BMSC，我当时就是这么做的，CD44和CD29都能达到95%以上，几乎没有表达CD45、CD34

不苦的药

胰酶浓度是多少的，第几代啊

imgaga

回复 不苦的药 的帖子
1 h/ R" G' w( S: a& ?* D4 l
9 T- \* Y7 n/ Q' o9 f0.25%胰酶，第一代细胞。

imgaga

回复 wangzhiqi86 的帖子6 A/ O8 H9 M9 q9 ~5 Q5 O3 D% T  T

& w4 g" N! s5 w, @1 p哦，下次试试你的方法，呵呵。我的细胞长的怎么这么难看呀？呵呵。。怎么张牙舞爪的？为何不是典型的长梭形呢？

imgaga

回复 Tonypan 的帖子& O8 P) q! T8 ~. O! L* x" t/ R
9 ?* Z- w9 s+ j$ ?4 v$ W* j9 |& B2 f* r) q
如果是其他细胞污染，该怎么去除呀？

imgaga

回复 wangfw 的帖子8 P7 C: r& j( K" O7 |. @

1 J: w# b+ V$ t, j- n8 I谢谢您的点子，呵呵，我试试~~

Tonypan

回复 imgaga 的帖子
9 Z- D5 r8 K' _, _, ~- M( `2 s
  T3 B# X# E! m5 k* g% h- q不知道你们有没有用磁珠做分选的？
6 b, x9 H1 b2 i7 H# X贴壁后消化下来的细胞用CD14 microbeads或CD45 microbeads做个去除分选。
( n5 j' ?7 C$ {骨髓里面单核巨噬细胞会贴壁
; ?9 F- j. Y$ q, ]可以试试这个方法。
; H; N6 _3 `8 q4 I能找到这个方法的参考文献Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells Ameliorate& c% O% I. ]" P* K
Autoimmune Enteropathy Independently of Regulatory T Cells' _# \* x. x$ f
cell stemcell 上的文献