帮忙看看灭活MEF的状态

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刚复苏了一支灭活的MEF，成活率不是很高，请大家帮忙看看这种密度和质量可以作为饲养层吗？; o, T- E; E8 k( G
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补充内容 (2011-6-18 17:49):
/ k4 Z$ C& G0 s: U: c+ U* N换液后的图片看的更清楚，在这http://www.stemcell8.cn/thread-41722-1-1.html

sunny2829

换过液了吗？效率不是很高耶~~~
( v& Y1 D4 m' H# B! \你作饲养层的话，太密了，一般1X10e6 per 10cm dish 这样种的话就好的了~~~

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没换液，复苏后刚贴壁的。我是用的T25瓶子  }4 n' m* g6 R4 h! l( U! f

pla269

不均匀，细胞状态也不好

第七舰队

楼主，你T25的瓶子，大约铺了多少量的MEF?

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回复 pla269 的帖子% f" U" |  M2 V% o) }
) s9 o% u/ D5 l
怎么不均与，怎么状态不好

sdjjfangfang

感觉MEF的状态还可以，做饲养层稍有些密，不过还可以。6 g) ~) h3 s7 o2 u0 `" S# ]
死细胞教多可能是由于你在冻存或者复苏的时候有问题，复苏时用的培养基是新鲜配置的吗？该加的东西都加了吧？
$ B3 _- b1 ^4 y0 }% W. f+ V如果认为是培养基的问题，可以考虑更换新鲜的培养基重新复苏一只。如果死细胞还是很多的话，可能就是冻存出了问题。* f" J# U. Z; _  D! V" ?

Jwian

楼主的细胞密度有点大，死细胞稍多。, n* ?$ `# f5 E4 [; |2 e3 F
刚刚复苏的细胞，最常见的就是死细胞。虽然细胞被冻存，但是也是一个有损伤的过程，死细胞不可避免避免。如果较多，要考虑你复苏过程中的操作时间、去除冻存液中DMSO的程度以及培养基的情况，另外是否有轻微污染的情况。
1 E8 s- E* {  `冻存管解冻时间：一般1～3min。讲究慢冻速溶。这个时候需要你将离心管培养基等等提前预热加好。# W2 i) o5 H; r
去除冻存液的情况：一般有些实验室直接将解冻的细胞接种到有新鲜培养基的皿中或者培养瓶中，24h后换液。但是这个操作DMSO残留太多，对细胞毒性大。如果可以的话，最好用离心管装有培养基后，将解冻细胞混匀后离心再接种。这样可以24～48换液或者传代。1 {9 P2 p( r+ H2 m* U+ l
培养基的情况：涉及营养成分如血清等等。, f! F' {' L+ S8 o3 Y2 y
轻微污染，会出现死细胞较多的情况，适当考虑这种可能！

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- q+ b" u6 k7 c$ _& ]! a6 x谢谢