转帖群里面的一个问题：关于ficoll分离法的技巧

细胞海洋

弱弱问一句，本人现在在韩国这边一所大学的实验室刚开始做有关干细胞的实验，但是因为处于刚起步阶段，现在有很多东西不了解。以前也不是学生物这一块的。现在做的是blood MC。实验过程中有一步是用ficoll分离法，加入hispoque以后离心，提取形成的膜，请问这之中有什么技巧可言。另外实验几次以后效果都不怎么好，请问有哪位前辈能指点一下这个实验过程中应该注意的问题，以及技巧之类的！拜托了！

yuheng

主要有以下几点：
, ]5 m; X) |' l9 Z- g7 _1. 血液一定要新鲜，超过24小时就不好分了
* v' _/ h- V: x- z- d" K( |, F2. 血液与等量PBS混合均匀，然后小心加入等体积ficoll（与血液等体积）上层
& @7 F  M  q( h4 f3 z! ^3. 离心时闸一定要关闭6 A0 A4 L) ^+ }6 {9 o
4. 取白膜时不要吸取太多上下层的液体，特别不要吸取下层红细胞

decloud2009

学习路过。。

jessica.jr

与PBS稀释后血液等体积ficoll吗？怎么我看到的文献说2：1比例啊（比如30ml稀释后血液加于15mlficoll上）

yuheng

对啊，PB 15ML+PBS 15ML +FICOLL 15ML

duoduo777001

我们现在用的是兔血，请问也要加入等量PBS吗？PH值大概是多少？我看书上说要求每一毫升血中加入0.1ml125~250U/ml的肝素，我们实验时候并没有加，但是保障了试验是在抽取兔血2小时以内操作的。试验了几次都没有成功，韩国人说是因为是兔血所以不用加PBS，请问确实是这样吗？

风再吹起

补充一下，一定要水平离心，离心结束不要制动，让它自己停下来（不用brake)。还有要注意分离液的适用温度

草莓牛奶

怎么加那么多ficoll啊？我们都是每管分离标本10ml ,ficol只需2~3ml

草莓牛奶

回复 6# duoduo777001
4 z8 _' p6 Y! W- ~5 y3 k. l/ o" k! |4 O, I1 }( ]) }2 \
; A) l) o$ u) R% |7 q0 @
    还是要抗凝的，但是分离前有没有凝血，肉眼也能看到啊。加PBS是为了稀释，和种属没关系吧...

dwl1209