如何去除质粒中的内毒素

hhs359853381

请问用什么方法可以去除质粒抽提中的内毒素

星移龙一

现在一般的生物技术公司都有去内毒素的质粒抽提试剂盒。

gl248576

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6 Z/ i! B4 _- w2 q0 t我们实验组用的是这个试剂盒：无内毒素质粒小量提取试剂盒/Endo-free Plasmid Mini Kit 50T，效果还挺好，而且还便宜) T' n  P6 O/ p) S5 D* v: M

hhs359853381

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谢谢
) ~* I2 U% D, D. w8 s& Y( b

蓝O海

内毒素只能是相对低于某个限值，不饿可能完全的没有。内毒素不是可以稀释掉么，你可以试着多倍稀释后在收集质粒啊，不知道我说的对你有没有帮助。
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shy8610

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; R, v6 i& _, \# G我们的通常做法是，如果是转染或动物免疫用的质粒，我们直接选用qiagene带去内毒素的kit（GIGA）,如果楼主已经得到质粒，我见过很多朋友（他们是私营生物公司），他们的做法是购买去内毒素的柱，过一次柱就ok

weiyepan

上鲎试剂网站看看，应该有去内毒素的beads卖。3 h, O6 d0 U! P4 c: g- f
Omega也有去内毒素的minispin kit卖。

huangcong1988

转细胞的话，质粒是要去内毒素的，那你最好就是用去内毒素的试剂盒提取质粒，这种试剂盒很多，omega，qiagen都有，如果你已经用不去内毒素的试剂盒提了质粒的话，建议你用质粒再转化一遍重提

做个好孩子

可参考BIOG实验步骤0 `# K. r9 y$ S
(请自备50mL离心管、20mL离心管、异丙醇、70%乙醇); V3 J3 Q  F1 X4 o9 u& h
取50mL菌液，置于50mL离心管中，4000rpm 4℃离心5 min，彻底弃除上清。7 L' E+ f: C5 {* x6 @7 @
加入3mL溶液A，充分振荡2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。4000rpm 4℃离心5min，彻底弃除上清。
- B+ k8 q/ Z- b6 j加入2mL溶液I和40uL溶液B，充分振荡2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。) v5 M- J/ d9 @( k
加入4mL溶液II，盖紧管盖，轻轻颠倒混匀6次，注意整个管子的内表面均需与溶液II接触，室温放置至溶液清亮。（一般为4-5min，如5min后溶液未变清亮，说明细菌过多，应考虑减少菌液量。注意混匀手法要温和，不要剧烈混合）7 O% A" d( L+ C: p4 A
加入3mL溶液III，盖紧管盖，立即轻轻颠倒混匀8次，4℃放置5min。（此步注意要尽快混匀，但手法要温和）3 U" {! a. ?) {* t* d7 n
10000rpm 4℃离心15min，小心吸出上清，轻移至新的20mL离心管。（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮）  ~! L9 b) o$ ]' l/ a$ t
加入6mL异丙醇，充分混匀，室温放置10分钟。10000rpm室温离心15min，小心吸弃上清，用吸水纸尽量吸去残余的液体。' u( g3 j) x/ [/ U# z
（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮）  L9 o! g( P' l  g, a! o% f9 z
加入3mL 70%乙醇，温和震荡30Sec，10000rpm离心10min，轻轻弃去上清，用吸水纸尽量吸去残余的液体，室温晾干沉淀。' S4 p6 }% `6 o9 w; J3 r
加入0.3mL溶液IV，温和震荡2min，使沉淀完全溶解并转移至新的1.5mL离心管中。9 H+ v5 D2 Z+ g$ G0 j3 t
加入10%体积溶液V，充分混匀，冰浴5min。( Z' f/ a" [+ s
加入3%体积溶液VI，反复吹打混匀，旋涡震荡15min。# {& i4 L6 T% w; G3 I0 Y
50℃水浴5min，室温12000rpm离心3min，溶液分相后，吸取上层水相至新的离心管中。
* |% c2 l  l1 n1 C: s9 d重复步骤10~12两次。0 D1 T2 H  [2 h" k, [: @8 P& j2 x
加入700uL无水乙醇，充分混匀，室温放置5分钟。12000rpm离心10min，小心吸弃上清，用吸水纸尽量吸去残余的液体。
& q$ o! t) y6 Z! `6 [( f4 w加入700uL70%乙醇，温和震荡30Sec，12000rpm离心5min，轻轻弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，吸去残余液体，室温晾干沉淀。
3 ~$ X' }! g/ }3 f1 w加入50μL溶液IV，温和震荡2分钟，使沉淀完全溶解。