细胞培养的污染（转）

sailboat

常见的污染如下：
7 c5 ?4 M, C( L1 d7 d1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
# o1 M6 X7 e5 x7 B; m7 L3 o仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！
  J7 J( z6 D# [* g可在培养液中加相应的抗生素处理5 i' f/ d+ g8 L

& w3 K" n: J. ~( t5 Y6 `' P9 e* M2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，% a( p- N8 @, H6 v
用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。( F4 g+ s7 Z) V7 ~1 y
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。+ t0 ~  v& a1 s1 s1 U$ E
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。0 U! y( u; C* {! s$ r5 u. O9 J
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作 $ X& H0 j0 ]. K

! o4 U3 f( H7 `) q& q3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。- B0 G8 b- x1 X! }9 \0 |1 S( _
用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。
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4、黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。
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3 |' Z3 R% X! t/ y  l$ K, z4 f5、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。8 K' b0 m+ A: W8 f
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6、原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。
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8 V  p# S" w: S3 n, E  l, @9 N2 @污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等
1 h1 n& K( v. l6 H  m5 v关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中（不加细胞），37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题。5 m3 l" a4 l# I
也可以在培养基中事先加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素）。但双抗有时会影响细胞的状态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。( }- s% `: O4 I0 @7 B
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1、孵箱应定期用三氧机消毒 或者 紫外光照射，并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水" j& @; o9 M* J8 ]7 }& o- X7 U" Q
2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素
0 a: B8 n' R& h" Q1 |' _3、超净台的风机不能过大，风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染/ w6 m8 ]" \) ?1 m
4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水喷洒中和，约几小时即可进入操作。

sajia

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sajia

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sailboat

谢谢支持～～

wenwen629

1# sailboat # E2 J* y9 G5 }) J  a5 X/ ?& r! z
对于第三点支原体污染的疑惑：我们实验室一直对细胞，血清做支原体检测：支原体并没有颜色，污染细胞后，培养基颜色会很快变黄，但依旧澄清；被支原体污染的细胞依个性而定，有的状态糟糕很明显；有的没什么影响．

yezi_830823

顶一下

telomerase

支原体而且它不能用过滤的办法除去。
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是可以过滤除的。 有0.1微的滤膜。进口血清都是0.1滤的，2次
7 y- a, p7 t! U) A
( h8 y, @$ T6 w$ |一般感染了，就不要了。想除比较麻烦，有不少公司卖除支原体试剂，周期漫长，而且杀菌剂对细胞的影响也不好预计。- }: n" x8 Z3 ]' b
我认为支原体感染，一般不是由操作引起的，是由血清或其他人细胞那来的。你除了细胞里的有什么用？源头又没控制。

火云豹

好贴 值得仔细学习思考

caifranklin

受教了……

flyingdream

学习了，谢谢