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本帖最后由 细胞海洋 于 2011-2-15 23:30 编辑
% w! P/ `* I% O: Z$ k+ n: n: a+ B! v' m5 z% x9 s% U
Z& k! S. ?" g& {9 d* L1 F' R注意事项 ! w% d) |0 d4 P! n
丝裂霉素C在操作时要避光，避免其分解。 8 W! q6 o; |. S
ES细胞倾向于聚集生长，因此在复苏时，要选择好培养皿的规格
1 G) [0 T P7 h/ B: l6 ~3 QES细胞不能长的太满，应避免使各个克隆之间接触，以免发上分化。 6 n1 E& f7 Y3 o
为避免水或血清带来的污染，对血清应进行支原体检测，配好的培养基要进行污染测试。
) r4 I5 z7 `5 Y! |环境：细胞培养需要一个无菌的环境，所以尽量是在一个独立的房间里进行。要求配有空气净化系统，能够对整个房间进行杀菌的紫外灯。 ( l" |! U/ a7 u0 _- u- L# x
设备：二氧化碳培养箱、超净工作台、倒置显微镜、冰箱、水浴锅、离心机、实验桌、移液器等。
3 ~2 p6 Q6 \; j8 C- Y实验耗材：一次性的细胞培养皿或细胞培养瓶、15ml或50ml离心管、脱脂棉花、封口膜等。 % e3 v) G; E% O8 J1 D/ M2 q
试剂：干细胞对培养条件要求较高，可以根据自己的条件，尽量选用质量好的各种试剂。 & j N9 D4 k0 t# s# V& }- U
试剂的配制：
! }# a) y/ A9 I' h& BDMEM培养基: 去离子水中含1.34% DMEM粉末、0.22%NaHCO3
% C! y. v8 t( ?5 @ lMEF培养基：DMEM培养基中含10%FBS, 1000u/ml 青霉素, 1000g/ml 链霉素 2 D4 R$ D! i5 w5 i% m. x
ES培养基: ES培养基：DMEM培养基中含15% FBS，1×106 U青霉素，1×106 g链霉素，1mM丙酮酸钠, 0.1mM 非必须氨基酸, 2mM 谷氨酰胺, 0.1mM 巯基乙醇, 1000u/ml 白血病抑制因子 4 C9 q0 _# O: ~, l; T7 m7 e/ Q
D-Hank's： 0.8%NaCl, 0.04%KCl, 0.035%NaHCO3, 0.006%KH2PO4, 0.005325%Na2HPO4, 0.001%酚红
( R; c2 J% ^! Q0 C) c% W0 S3 N0.1%明胶: D-Hank’s溶液中含0.1%的明胶 ' p% I' M( I- }# `: `
ES细胞冻存液：90% ES培养基，10% DMSO
; F, ?" N9 v! J' N5 GMEF细胞冻存液：90% MEF培养基，10% DMSO
& `$ H2 Y5 N A7 r: I. E4 TFeeder细胞冻存液：90% FBS ，10% DMSO / |6 Z% h9 U# ]/ q/ B
丝裂霉素C: 根据产品说明书来配制 ( H# J0 A9 t+ {6 w3 a9 l7 e+ `% g1 M7 m
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发表于 2010-11-13 14:42
