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武汉病毒所人工合成杆状病毒
. U3 n5 r3 u2 k8 z4 Y, v来源:武汉病毒研究所 / 作者: / 2017-05-03
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. B! ~. [8 c, k5 E, U }图:杆状病毒人工合成的工作原理示意图(A)及病毒电镜观察(B)
5 o. r" _7 O+ i M" [+ u8 B4 Q合成生物学技术作为 21 世纪的一门新兴生物学技术,推动了生命科学乃至整个自然科学领域的发展。病毒的人工合成为深入揭示病毒的本质和功能,以及病毒的遗传改造提供了强有力的工具。以往,对病毒人工合成的探索主要集中在 RNA 病毒上,而目前已知最大的 RNA 病毒基因组也仅有~30 kb。迄今为止,所报道成功合成的 DNA 病毒最大不超过 6 kb。杆状病毒是一类大的双链 DNA 病毒(基因组大小 80-180 kb),在生物农药、真核表达系统等领域具有重要的应用价值。近期,中国科学院武汉病毒研究所研究员胡志红课题组联合运用 PCR 及酵母转化相关的同源重组(Transformation Associated Recombination, TAR)技术,首次合成了杆状病毒模式种 AcMNPV 的全基因组,并通过转染细胞成功拯救出了有感染性的人工合成病毒。, E. t7 z R* C1 ~
研究人员首先利用 PCR 扩增覆盖 AcMNPV 全基因的~45 个片段,每个片段约 3kb,相邻片段之间有大于 60 bp 的重叠序列。然后利用 TAR 技术,在酵母细胞内进行了三次重组,依次获得了 9 个~15 kb 的片段、3 个~45 kb 的片段和全基因组(145,299 bp)。将合成的病毒基因组进行了 454 测序验证,通过转染昆虫细胞成功获得了有感染性的人工合成病毒 AcMNPV-WIV-Syn1(图 A)。电镜、一步生长曲线和生物测定等结果表明,合成病毒与亲本病毒具有相似的生物学特性(图 B)。
X7 o; r) q' Q: S5 U) m" X% s8 y该技术的建立,不仅为杆状病毒的基础研究提供了有力工具,还可以用于改良杆状病毒的表达系统和杀虫性能。该研究是大 DNA 病毒研究领域的重要突破,被审稿人认为“this is a highly significant paper that will serve as a landmark in synthetic biology”。6 ~- \( Y/ L/ b8 t0 ?: a. |* \; Y
这一研究成果已经在 ACS Synthetic biology 杂志上在线发表(DOI: 10.1021/acssynbio.7b00028),武汉病毒所的博士生商雨为该论文的第一作者,研究员邓菲和胡志红为该论文的共同通讯作者。该研究得到了中科院战略性先导科技专项(XDB11030400)、国家自然科学基金创新群体项目(31621061)和重点项目(31130058)、中科院前沿科学重点研究项目(QYZDJ-SSW-SMC021)、中科院知识创新工程项目(KSCX2-EW-Z-3)、病毒学国家重点实验室病毒学前沿科学重点研究项目(klv-2016-03)、“973”项目(2012CB721102)的资助。5 ^. N/ f2 @8 ? M! {
http://pubs.acs.org/doi/10.1021/acssynbio.7b00028$ l7 u+ p0 ~% |: r$ w0 m
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