免疫细胞培养内毒素检测取样及合格标准

免疫与细胞

我们说在内毒素检测时的待检样品，这个说法是不是太过宽泛了。对细胞生产过程内毒素检测来说，何时取样、取样样本类型（细胞液，生理盐水悬浮液）、处理办法（比如需不需要离心）、内毒素检测阳性指标（100ml产品来说，其内毒素含量是低于1EU还是有其他标准），不知大家有什么看法。

colins

在《中国药典》上规定对于待检样品要做干扰试验，对于样本类型的问题，可以做个干扰试验看看，如果细胞液没有干扰的话可以选择细胞液作为样本类型的，有干扰的话就要另作考虑生理盐水是否合适；至于内毒素检测阳性指标，这个是有公式计算的，不过需要注意的是，取值的时候一般要比计算值严格2-3倍，比如计算出来是1.5EU/mL，而我们实际操作的时候会取0.5EU/mL。对于何时取样的问题，我们一般是在冻存和细胞回输之前取样，从我们的经验来看，内毒素的超标比例还是很小很小的，没必要在培养过程中就取样，有点浪费幺

cheeray

回输前两天进行取样检验就可以了。，检测过程也是需要时间来观察。检查后的收集也要注意无菌操作。不能松懈。要对病人负责。

元杰5

针对楼主说的，在生产过程中取样检测没有必要也不准确，因为如果培养过程中没有大量染菌（而且是G-菌）那么细菌内毒素就不会超标，需要做好的是1.物料的检测，确保

元杰5

元杰5 发表于 2015-8-12 11:24 2 O- P8 N) ^6 i8 J( Y7 e
针对楼主说的，在生产过程中取样检测没有必要也不准确，因为如果培养过程中没有大量染菌（而且是G-菌）那么 ...

9 t% N) O7 Z2 \" K0 a  u) N- C……发错重发……针对楼主说的，在生产过程中取样检测没有必要也不准确，因为如果培养过程中没有大量染菌（而且是G-菌）那么细菌内毒素就不会超标，需要做好的是：5 |% S3 i/ [( m0 r& d+ u" x& y
1.物料的检测，确保不被所用物料污染（很多国产的质量较差的物料都会有内毒素超标的情况）；
. Z+ L& j0 C% _* M& [: V2.回输前进行检测，这是硬性要求，回输到人体之前必须确认内毒素浓度在正常范围内。但要注意的是，检测的样品要与回输用的样品完全一致，否则检测出来的结果也不具可信度

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回复 colins 的帖子
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谢谢，学习了。另外请教一下，在细胞回输之前取样，是最终产品制备完成后，从最终产品中取（0.9％生理盐水重悬的细胞液）样吗？如果是，样本中存在一定浓度的细胞，样本是否需要离心取上清进行内毒素检测？不知有没有此类经验

colins

可以在最后一步离心的时候取一些上清液做内毒素检测的；如果你样品多可以像你说的从最终产品里面取（0.9％生理盐水重悬的细胞液）样，我以前做的有细胞也没事啊，先做个干扰试验确定一下，应该没事

colins

回复 元杰5 的帖子9 I' w$ F) K/ N

  t( a* B6 f2 p- R  F如果回输的样品做内毒素检测有干扰怎么办啊？

元杰5

回复 colins 的帖子" B& m- e/ q4 I- c. k8 D# X& W7 u

  c0 R9 E5 |2 D3 q  k8 q: B* _: j初期必须要做干扰实验，这个你前面提过了，一种样品类型做一次干扰实验就够了。“一种样品类型”指的是，比如说同一种生理盐水重悬的细胞液，细胞浓度一致的就是一样的

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回复 colins 的帖子: j& K1 U! _6 Y) @- `# C
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非常感谢，你是说在细胞最后一次离心清洗时取生理盐水上清作为检测样，那这个检测结果与最终产品的实际内毒素指标存在何种对照关系。也就是说，如果检测生理盐水上清，0.5EU呈阴性，那最终产品的内毒素指标是不是也在0.5EU以下，并且小于检测的生理盐水上清中的内毒素指标。（生理盐水离心清洗会不会降低内毒素水平？）