ips 诱导

陆萌

一直在做猴子的ips诱导，使用慢病毒pspax2/pMD2.G 和四个转录因子的质粒包装病毒，之后用miliipore的超滤柱浓缩，但是一直没成功，求指点~~

scottist

首先确定你的质粒能包装出有活性的慢病毒，可以在感染慢病毒2-3d后提RNA检测下转入的四因子是否过表达；如果慢病毒有活性，那就可能是滴度的问题了，测一下包装后的滴度，毕竟蛋白超滤柱只能浓缩10倍左右，如果滴度太低就要考虑更换一下慢病毒包装系统了；另外原代培养的细胞传的代数太多也会增加诱导的难度，你可以考虑使用下文献报道的提高诱导效率的方法，例如：加P53阻断剂（siRNA之类的），加ROCK的抑制剂Thiazovinvin，加ALK5的抑制剂SB43142，加巴尔普罗酸等；最后，你用人的四因子诱导猴子的iPS是否也会使得效率低下。

wangshumin12311

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+ I, b( x4 X+ N5 q4 p, j. I8 A7 p# b3 f0 {
猴子很不好做，关键是培养体系的问题，我之前做了一年多猴子的直到最后才摸到合适的条件，，，，，一般报病毒没问题。。。。

陆萌

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: |  z6 C7 C; H5 ^, h8 S4 H
8 J& a$ Y" b  S2 Q& P0 e$ l6 p请问您用的什么培养体系呢，我之前用灵长类干细胞培养基以及文献报道的20%KSR+bFGF试过，效果都不好

陆萌

回复 scottist 的帖子! j& C: {1 X8 f1 b3 f+ [* T( \8 W
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多谢指点！包装病毒我有GFP的平行对照，也用对照病毒感染了，能看到皮肤细胞有荧光，您提到的提高诱导效率的方法我尝试一下。非常感谢!

wangcs

诱导体系中建议添加mir302和200c效果很好，试试能不能从北大邓博要来猴的因子；培养体系目前有点杂，可添加的东西太多，还是从2i开始试吧！

1175374245

你好，请问有人做过将猴子的皮肤成纤维细胞诱导成ips细胞的经验么？本人目前在做，希望能一起交流！

细胞海洋

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& V! b# C2 @3 T0 p- Z; K; ^% l0 [+ n6 A8 q" D5 o& H, W; Q1 D2 _
建议你发新帖提问 并详细说明你的问题

a422778

wangshumin12311 发表于 2014-4-10 18:01 ; c  d/ ]" S6 j1 l$ ^! l
回复 陆萌 的帖子, H- w6 S: s3 h( F, ]2 [4 r

1 j* b$ I- ], f6 k' i猴子很不好做，关键是培养体系的问题，我之前做了一年多猴子的直到最后才摸到合适的条件 ...

# x8 _; Y/ @' P
请问你用的什么培养体系呢

陆萌

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, ?. @* p5 E  K( B# Z1 \
/ t% Y9 a( v$ w; `$ M# p我跟你做的应该差不多，你是用慢病毒载体么？可以交流下