关于PEG8000的配制问题

huangcong1988

不知道40%的PEG8000怎么配制，有的说是直接用去离子水配，也有说用去离子水配后加氯化镁，到底是怎么配制呢？而且PEG8000是用来浓缩核酸的么？

john7812x

聚乙二醇(PEG)在不同的盐溶液中可以结合形成孔径不同的网状结构,重组质粒是超螺旋的双链闭合环状DNA,它们与RNA 、线状DNA等其他杂质分子在PEG中的沉降系数不同。通过高速离心，使沉降系数较高的重组质粒DNA沉淀下来，而其他杂质分子和不同构象的质粒DNA分子被网状结构阻隔，从而纯化质粒。* D; N6 d8 Z9 \$ W! q

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子
) o; e/ p3 Z" h; M- R( n! j7 F- Y! l
哦，纯化RNA也行是吧？那40%的PEG8000该怎么配呢？

zhusealin

浓缩核酸的不太清楚。我们是用的50%PEG 1500做细胞融合用的，配的时候就用PBS溶解，高压灭菌

huangcong1988

回复 zhusealin 的帖子
/ g5 u; X2 O2 d- G8 r; {' p) D8 ~* I& K0 O# C* a, u* q
是，PEG也用于细胞融合

john7812x

回复 huangcong1988 的帖子% D9 D  I/ G4 c' i( C3 i

& }! ~+ D2 Y# p( |& N4 R  ]; hPEG8000可以纯化RNA，如网页中所述：http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16186.html' u, }$ j( v3 T) Z; l
但是，我没有用过PEG8000提取RNA，我用试剂盒提取小量RNA，或用Trizol提取大量RNA。! o7 \. S+ T0 e
0 h7 h- Z9 v6 L
40%（w/v）PEG8000 用去离子水配，如文件中黄色部分所示：
0 K# [% X" p( ?/ g' i
9 C) L- H8 x9 Z/ k% D' {1 {8 K1 E' p9 P7 P2 d1 @
假如你打算用PEG8000 提取RNA，建议用DEFC处理过的去离子水来配制。

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子& q& t: D, I. h. g$ G0 J+ g

" ?6 s; v! q, t' ?1 o! l# m3 P不是提RNA，是浓缩，就是已经收集的慢病毒上清，想用PEG8000纯化一下，谢谢

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子
6 f0 ]. Y6 }/ j' O- \& w
& H- d! `) o; f) P& o  j7 ^# l有道理，慢病毒上清要纯化的话呢？慢病毒是RNA+外壳（蛋白），那去离子水是应该用DEPC水处理一下

john7812x

回复 huangcong1988 的帖子
; m0 c6 \# ~2 d, V3 f/ v7 G
' @) h3 M) k2 ~, w你是不是打算浓缩Lentivirus，来提高它的滴度, 为下步感染实验做准备?
- p6 `3 [. N1 f8 R) B4 J/ J1 Z6 `还是要浓缩Lentivirus 的RNA？$ ~6 |' I1 K* \7 k

+ e9 k) N2 g7 E; U) v若是为了提高病毒滴度可以超速离心的方法：
& P0 R3 @& f# f& ?1 K) `, F8 b. ^8 o9 W2 g% U! r
若是为了浓缩RNA，可以冷冻干燥，或沉淀RNA后再溶解，等等。8 c! O( O. Z6 Q2 ~- S

: x) @' Q7 b/ h' N  T( R补充内容 (2011-11-1 19:54):2 v! m, w& e6 @! q: e' k( H
在这个超速离心的protocol 里用的是sucrose, 没有用PEG，可能和你实验室计划不同。

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子! w, J7 V( ^+ c/ M- q

; i/ |, h9 k3 z3 e) s' L( F1 p非常感谢！我是为了浓缩慢病毒