怎么样将出生后6天雄性小鼠的体细胞和生殖细胞分离？

chenchunlei

      本人想将出生后6天的雄性小鼠睾丸消化成单细胞后，怎么样才能将体细胞和生殖细胞分离，并且想去鉴定一下分离得到的生殖细胞，如何去鉴定？% L, \: P9 B4 f- T+ a- D
   谢谢

sj03572001

可以通过THY1磁珠分选，或者先将分离的混合细胞铺于明胶上沉淀一晚，第二天将贴壁不牢靠的细胞（大部分为精原干细胞）轻轻吹起铺于饲养层上培养。

chenchunlei

回复 sj03572001 的帖子" l: R) k9 H& ?6 n% R5 |' D  Q1 b9 G4 T

) I% O' B4 J' s4 @用10cm培养皿直接培养不行吗，那样体细胞会贴壁，生殖细胞悬浮吗？为什么还要铺琼脂呢？还有怎么去鉴定是精原干细胞啊？
. @: ^5 C' b" G, Z$ d- k; N

sj03572001

明胶有助于成纤维细胞贴壁，至于精原干细胞的鉴定，可以采用SSC的标志物通过免疫组化进行鉴定，标志物包括MVH, Cdh1 ，THY1， plzf， nanos2, Oct4, Stra8等

POPOLD

差速贴壁

chenchunlei

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什么叫差速贴壁啊？今天消化成单细胞之后培养了3个小时，结果大部分贴壁了。
5 ?6 p6 y. S- a培养液成分：DMEM 、a-MEM、 丙酮酸钠、PS、FBS

490096812

分离的话我们一般用差异贴壁，用多聚赖氨酸处理的。染色鉴定的话一般我们用thy1，plzf。分化的用c-kit

ying

又来一行家

chenchunlei

回复 490096812 的帖子0 c- Q3 W$ i1 t6 a, e$ ~
1 t0 P# U; H# P+ W6 a4 ]
半小时贴壁后，用的vasa一抗做得组化，阳性率也就有百分之五十吧，是不是贴壁时间太短了啊

490096812

百分之50我觉得很高了 啊