人胎盘间充质干细胞问题？

hhxxattxs123

请问组织块培养法长不出细胞来是什么原因，还有就是组织块容易飘起来？人胎盘最好是新鲜的对吗？有人培养这个细胞吗？有的话可以介绍下您的方法吗？谢谢

grape

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7 ~" ]" s7 G, U' T! x回复 hhxxattxs123 的帖子+ n/ ~5 [8 r) B) A( ~

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6 ]3 S- l8 `% G: b# v6 @组织块容易漂起来一般是因为干烤时间不够。一般要烤1-4h不等。不知你目前烤了多长时间，再适当延长时间试试。
  ^# u) w) K0 ]. D还有，将培养瓶翻转平放的时候要慢，以免液体冲击组织块导致漂起。
( t& v7 j: R( t7 N! V$ E% ^人胎盘当然最好是新鲜的，离体时间越短越好，最好不超过3小时。
* F& U! b8 k4 Y, A2 X+ `我们一般用人脐带分离MSC。
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hhxxattxs123

谢谢哦，我的是用培养皿，用的是羊膜组织，就是剪碎了，也没有酶来消化就贴在皿上，等了20分钟就加培养液了
- ?+ P8 M  h2 h) z0 M时间长了，怕组织细胞死亡。

单个核细胞

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, X* u3 M! T6 j) l9 K4 ^  H你可以先试试脐带华通胶组织块贴壁，熟练之后再行其它胎盘组织来源间充干的培养，贴壁时间适当长一点，然后再加入完全配液，这样有利于组织贴壁牢固。另外，也可将培养瓶倒置加液，待3-4h之后翻瓶，使培养液缓慢流遍组织块周围，然后放置培养箱静置培养。
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参考帖子：
! \' N2 O& R  u* y/ }) t脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：
* A) I5 _8 i$ S/ P5 L: Mhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html4 X# R! L' T; N! R6 i
请教华通氏胶的剥离：! f) Z4 [6 p2 K' N: r
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
) ^4 _# U0 V2 I$ Z/ E7 m应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：
4 v5 Q' |1 W. y3 _- r, u& F) Vhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
- `1 [% v( W8 B  ^1 O脐带间充质胶质的备置：+ [) n- A! Z" S( q! l% U% o0 b0 v# |
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html% j$ B8 u& ~) A$ C$ d
脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：
/ a0 r; J( c* i7 Hhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html9 l% X7 N, J( J' n& {7 e( g- R
脐带间充质贴壁法到底几天换液：
$ h* ^! ^6 q6 R* G! V1 u7 x0 w$ khttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
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参考文献：
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单个核细胞

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回复 hhxxattxs123 的帖子! |& l$ ^8 B2 o. C4 H; D# I

4 e4 d8 h( P- J2 p% F+ b5 K贴壁法培养胎盘组织时，可取小叶，尽量清洗干净（去除红细胞），然后充分剪碎，可用吸管进行贴壁。贴壁3-4小时候（可以过夜），补加完全培养液，加液和转移的的时候务必小心，不要让培养液剧烈震荡，避免组织块漂起，培养箱静置培养，以后观察时也需小心操作。' c/ g9 m" Q* ]9 }/ v0 `' w+ r
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羊膜操作比较困难，太滑，不容易剪碎，其粘性不如华通胶，这就导致贴壁后很容易漂起，可慢慢摸索。

xiaolong

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' a7 ]/ G. \1 a  f$ a+ ?# R: c2 u20分钟就加液时间太短了，1小时试试，可以参考一些华通胶贴壁培养的文献中贴壁的时间

hhxxattxs123

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8 @! L- [/ Y6 ?" ^" W! M
" `$ s/ l8 O! t  v5 T$ n) o9 ~非常感谢啊，我最近在用你的建议来做，效果比以前强了呀，

回到从前

建议你还是选择胶质多的地方贴块，块尽量别太大，倒置2小时以上 应该可以 我们做过 就是细胞比较杂

sailree

说一个简单点的方法，在100mm培养皿中加上2ml培养液然后将处理干净的组织放在这2ml的培养液里，然后用剪刀剪碎后，平铺开放培养箱24小时后补液至10ml，一般约5-6天半换。10天开始观察细胞，并全换以后3天换一次液。

院士站

是不是加液太多