脐带间充质干细胞问题

topling

最近培养的细胞容易变老，而且培养基中死细胞较多，请教各位高手会是什么问题，如何解决

流泪的鱼

用放大倍数多的物镜观察，是不是间充质干细胞周围有小黑点，生长缓慢，形态没有开始时好，那就是支原体污染。

stand_up

你如何确定的细胞变老，细胞形态？死细胞过多，要及时换液，PBS清洗2-3次，在补加新鲜培养基！

tangyvhuang

正如楼上两位所说，支原体污染有可能，同时要勤换液，多洗两遍。同时培养体系是什么？血清的两要是太高的话，也容易老，同时接种密度也是问题，过高也很容易老的，长的太满也老

1301918986

回复 topling 的帖子
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% @! Q. ~6 h- E8 Y) k+ f( s0 s7 P8 V恩，最近我们的细胞也出现这种情况，普遍长得很缓慢，不知道是哪出了问题

ditiger

怎么说他老了？是生长慢了？细胞变大了？MSC衰老也应该有几个指标可以看的，请LZ再详细说说你所遇见的情况，拍下照片传上来，大家一起讨论一下。

ditiger

怎么说他老了？是生长慢了？细胞变大了？MSC衰老也应该有几个指标可以看的，请LZ再详细说说你所遇见的情况，拍下照片传上来，大家一起讨论一下。

雾里看花250

1.接种密度的影响：部分细胞能分泌一些对细胞有支持能力的因子类物质，所以必须维持一定的接种密度，否则容易导致细胞增殖减慢，最后表现出老化。7 ]4 ^2 d/ |- t6 q5 h# S3 F0 _
2.消化过度：消化细胞时会对细胞的表面蛋白有较强的损伤，所以消化时间不能过长。0 Q& t0 t3 V1 Z6 g1 G' g2 R9 C
3.细胞过密时接触抑制作用导致细胞的活力减弱并影响增殖导致老化。' F- ?6 w6 L# e" f* J

topling

首先谢谢各位！我们的原代细胞生长较慢，且大多数成团生长，分部不均匀。我们在传第代时通常先传一个小瓶再传大瓶，再分瓶。因为原代细胞状态好的非常少，而且生长很慢，有的根本张不起来，所以只能先传小瓶。传过代后细胞生长较慢且容易衰老，边缘变得不光滑，面积变大。在养得过程中会有会有很多死细胞和细胞碎片，我们每四天换一次液，换过液后也会有大量死细胞，大部分细胞会变大颜色变暗淡成不规则的网状。还有我们养的间充质细胞应该不是支原体污染，这个我们每次都做检测。还有在第一次换液时我们会在培养基中加EGF，血清用的是进口的，一般加入10%。照片我尽快拍了上传，劳烦各位了。

topling

回复 雾里看花250 的帖子3 R2 O+ K& ~* G6 t

+ r5 ]( [) a) C$ `首先谢谢各位！我们的原代细胞生长较慢，且大多数成团生长，分部不均匀。我们在传第代时通常先传一个小瓶再传大瓶，再分瓶。因为原代细胞状态好的非常少，而且生长很慢，有的根本张不起来，所以只能先传小瓶。传过代后细胞生长较慢且容易衰老，边缘变得不光滑，面积变大。在养得过程中会有会有很多死细胞和细胞碎片，我们每四天换一次液，换过液后也会有大量死细胞，大部分细胞会变大颜色变暗淡成不规则的网状。还有我们养的间充质细胞应该不是支原体污染，这个我们每次都做检测。还有在第一次换液时我们会在培养基中加EGF，血清用的是进口的，一般加入10%。照片我尽快拍了上传，劳烦各位了。
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