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苏木精染色
) t+ l; ~9 O( |& s( L8 ?. t- }【中文名称】苏木精
6 N8 A# Y/ I9 d: o6 L& c; m0 o【英文名称】hematoxylin;h(a)ematine* U: U1 r; u7 Y
【性状】
7 _: k* N* j% \ 无色棱形晶体，遇光变红。. f+ F) h* {6 q1 [& `( k
【溶解情况】2 R% x7 c; f: x( J E8 K) ]
难溶于冷水和乙醚，易溶于热水和热乙醇，溶于碱、氨和硼砂的溶液。: t8 X7 Q" L( N! j8 Z& g3 o6 B2 D
【用途】6 }$ b8 ]2 S4 m6 k
一种天然媒介染料。用于蚕丝、毛皮和皮革的染色以及棉布的印花，用不同的媒染剂可得到蓝色或黑色。与重铬盐、铁盐、亚铁盐、铝盐和锡盐等一起可制成各种色淀。在分析化学中用于比色分析、显微镜分析，并用作pH值指示剂，变色范围5.0～6.0，由黄色变紫色。苏木精(hematine)为碱性染料,将细胞核染为蓝色;
" o- Y5 Z' z8 U【制备或来源】2 S' n$ [0 f% A, ], i
由苏木树的木材获得。; ~3 D* X6 } J( B N4 }3 K
【其他】
5 t4 H$ a/ {) \ ]& ?/ | 含有3分子结晶水，在100～120℃溶于本身的结晶水中。在水溶液中，特别是在碱溶液中易被空气氧化成红棕色的氧化苏木精。/ N. ], q) s! p) e3 _1 i: z- h
常与伊红配合，苏木精将细胞核染成蓝色，而用伊红（署红）将细胞质染成红色。- }$ R, V8 z6 m: d5 h9 o
溶液要避光保存。( a% u/ m. U) J8 y8 L5 o) w! c
2 N% p! `5 `7 E% E配方：/ p: i) w% T7 p3 T
苏木精的染色液有很多，如通用的苏木精染色液和各种改良后的苏木精染色液等等。7 Q }3 @9 L' Q* }5 ^6 h0 e0 G0 D, v
一，改良的苏木精染色液一
- Q5 E0 u% H& s; c$ t( m 材料 苏木精2g，无水乙醇250ml，硫酸铝10g，蒸馏 水750ml，碘酸钠0.5g，柠檬酸1g。方法 将苏木精溶于无水乙醇，将硫酸铝溶于水，两液混合加热煮沸2min，加入碘酸钠及柠檬酸。优点 此液存放时间长，染色力保持时间长，染色效果好。
9 i8 w; i n# k& W 用硫酸铝替代钾明矾染液久放也不会产生沉淀、结晶，不用过滤即可使用。此液存放时间长，染色力保持时间长，经过我室比较，使用时间可比哈瑞氏苏木精染液长一倍。1g苏木精配置的染液是哈瑞氏苏木精染液的两倍，更加经济实用。此液染色效果好，染色时间3～8min，特别是染色质显色清晰，但应注意一些染色技巧，配置盐酸酒精分化液时，浓度稍低，一般控制在0.8%左右，分化时间稍短，应在30s之内。氨水配制成1%，返蓝时间要较长，一般控制在1～2min，充分水洗后再进行下面的染色。# P7 j6 |& G, @9 g1 M9 O
6 C- C$ [: W6 l1 z* o7 r+ y二 通用海登汉氏苏木精染色液
5 y0 x Y1 D5 [2 s! t; r海登汉氏（Heidenhain's）苏木精染色液，又称铁矾苏木精染色液。 ; \4 B1 {* d% Z z0 @3 O0 V4 B
配方：甲液（媒染剂）： 硫酸铁铵（铁明矾）2-4g ；蒸馏水100ml （必须保持新鲜，最好临用之前配制）。& g3 v" p5 Q1 I- o. N J
乙液（染色剂）：苏木精 0.5-1g ；95％酒精 10ml；蒸馏水 90ml
S+ Z% o8 b; F' S% C* W* D配制步骤：
, K5 \2 j( m2 U1 Z! X2 z. i2 w" B9 x（1）将苏木精溶于酒精中，瓶口用双层纱布包扎，使其充分氧化（通常在室内放置两个月后方可使用）。
- |% n0 I, P2 B3 B& |5 D' [（2）加入蒸馏水，塞紧瓶口，置冰箱中可长期保存。 & a2 Y& V4 }$ Y, H; M' w2 t
切片需先经甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。 铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂，但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。
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0 q/ d* p6 @; J; O* G5 u7 ~配方三：苏木精水溶液 # S6 E0 z! {; g: V& \ p2 d
0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。 % j0 s' r3 p7 O/ B& ~0 V
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配方四：代氏苏木精（Delarfield’s haematoxylin）
0 G0 y" F. e- f1 P! p甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml + y: c# Y; i. G e5 g
乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml
0 J7 b N' m7 y* S丙液：甘油25ml + 甲醇25ml
, L. `4 d0 u: M分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加入丙液，混匀后静置1~2月，至颜色变为深紫色后，过滤备用，可长期保存。 & S- j3 H% F% w
* C* V1 w0 K, r/ G K
配方五：爱氏苏木精（Ehrlich’s haematoxylin）
% e9 n p$ L" G j. K苏木精1g + 无水或95%酒精50ml + 蒸馏水50ml + 甘油50ml + 冰醋酸5ml + 硫酸铝钾（钾矾）3~5g。配制时，先将苏木精溶于酒精中，然后依次加入蒸馏水、甘油和冰醋酸，最后加入研细的钾矾，边加边搅拌，直到瓶底出现钾矾结晶为止。混合后溶液颜色呈淡红色，放入广口瓶中，用纱布封口，自然氧化1~2月，至颜色变为深红色时即可过滤备用，可长期保存。8 y* ~( A% S( \. s( G% @! f I
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染色方法：
* ]( ~. n; @0 t7 R, M一 石蜡切片的苏木精-伊红染色法
0 P& W1 N) s5 J8 }（1）切片在二甲苯中脱蜡5～10分钟。: b- w% Z# a* a
（2）移入二甲苯和纯酒精（1∶1）混合液中5分钟左右（如经二次二甲苯脱蜡，此步可略）。4 D+ r" M% l4 J5 c' I2 J" [
（3）入100％、95％、85％、70％酒精，各级为2～5分钟。最后经蒸馏水转入染液。+ K$ z4 F. ?9 Y* G
（4）苏木精染液染色5～15分钟。、1 D) S' f& n* r
（5）水洗玻片上多余染液，0.5～1％盐酸酒精（70％酒精配制）分色片刻。镜检控制，直至细胞核及核内染色质清晰为止，约数10秒钟。
{* a/ M+ h7 P" B, J7 z% e" D（6）流水冲洗15～30分钟，或者在碳酸锂饱和液中短时间碱化或蓝化，即细胞核呈蓝色。（7）蒸馏水短洗。
8 L7 d! L4 O) a/ u6 D5 [; c（8）0.1～0.5％伊红染液染色1～5分钟，若着色困难，可在每100毫升染液中加入1～2滴冰醋酸，使易着色且不易脱色。% E# y' H9 J, D* F: V
（9）依次经70％、85％、95％、100％酒精脱水，各级为2～3分钟，在95％以下浓度的酒精中伊红易脱色，应适当缩短时间。
( C/ ~6 r" m/ A8 S, k（10）二甲苯透明（二次），共约10分钟。, Y: S, G% u/ S
（11）封片：擦去切片周围多余二甲苯，切勿干涸，迅速滴加适量中性树胶，再加盖玻片封固。$ B8 ^: k. [" Q5 o
- h* C* X* W7 q' D8 s! P0 s/ {还有其他很多的苏木精染色的方法，主要是用于对染色体的染色，基本方法都差不多，大家实验室都有我就不啰嗦了。 |
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总评分: 威望 + 12
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发表于 2010-11-17 14:03
发表于 2010-11-17 16:17
