间充质干细胞的慢病毒转染效率问题

liqiang8589

最近想用慢病毒过表达干细胞。 在293包病毒的时候效率高， 但是把病毒转染到干细胞的时候，却效率很低。 有哪位大神可以告诉我干细胞转染的时候注意事项或特别用的试剂。 我用的是 polybrene (8ug/ml) 转染试剂。
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yaolinzhang

回复 liqiang8589 的帖子2 x0 ]! I9 ^$ `  e$ N& z7 Z5 R0 P9 q; O& l
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需要注意的地方：1.细胞状态需要好；2.细胞接种密度，不能过密，50-60%即可；3.病毒滴度，慢病毒感染间充质的MOI大概在50左右，所以病毒滴度一定要高，这很重要；4.polybrene对细胞有毒性，注意用量

ljzmy82

可以二次转染一下，效果就好很多

lgfffancy

首先，可以肯定的是ploybrene的用量是没有问题的，我们实验室都是用的这个浓度，是没有问题的，所以可以排除polybrene的影响。其次有两个很重要的问题就是，细胞状态、密度，病毒滴度，这三个因素应该都好控制；不用灰心多试几次，一定能够成功的。

liqiang8589

回复 yaolinzhang 的帖子2 U7 |* ^0 Z( r5 d% o3 O. W

" `' G3 K' F) y. T我用293FT 细胞来做对照组 4 z# u4 |" E8 X9 I/ f5 Z. x
293有50%有表达GFP， 但是间充质干细胞一个都没有表达。

liqiang8589

有的论文有慢病毒转染之后用离心来提高效率，这个方法有用吗？？

yaolinzhang

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6 E6 ~3 b5 ]9 b" a9 L( C
2 \4 ^1 m+ d5 C7 D293很好感染的，但MSC就没那么容易了，估计你的病毒滴度不够，慢病毒的实验滴度很重要

liqiang8589

回复 yaolinzhang 的帖子" f, R5 f' t- c8 {. R4 F
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谢谢老师
! r4 r' n& Z- |* p( k+ K除了超高速离心慢病毒外有好一点的浓缩试剂盒吗？？

yaolinzhang

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+ v3 m" E- h( R5 f4 G
5 i) C( Q( [* F你可以 去Hyclone网站上试试，不过这方面我倒没用过，建议还是买进口的

haibara007007

回复 liqiang8589 的帖子) {0 B( f& B8 X- w; v+ L! C

" R* J: L6 e1 T$ `2 w( _一定要注意病毒滴度啊，用浓缩柱浓缩一下，要不转染会很费劲