关于融合液的问题

st_oliver

第一个问题：孤雌激活所用融合液和核移植所用融合液是否一样？如果一样，大家都用的是什么公司的，或者是怎么配的啊？如果不一样，问题一样。) N0 c, T' P5 r. K1 e# {: V
第二个问题：不同物种孤雌激活和核移植所用融合液差别大否？那么猪呢？
1 i$ |) s% b' q4 O! _3 m- ~: V第三个问题：我看到一个配方，其中0.28M甘露醇…，请问这个甘露醇是用水溶呢，还是NaCl？怎么调PH？9 ^( _0 `* I* h3 |
非常期待得到大家的帮助！[/color]
7 c& @) {5 Q, b9 g在动物克隆与疾病模型板块，貌似更新很慢，上一个帖子还是10月十几号的，就挪这里了。

POPOLD

水溶                 不调    * }7 w& ~# H, X/ F5 `5 X( _
配好后 是弱酸  6.8左右  ，如果要调  用1mmol naoh  

xiaomingxu

# m! N; ~5 }' u4 X0 N

0 z# `  F" Q  v) Q# j回复 st_oliver 的帖子
1 R7 e, f, E/ U: {' i7 u7 ]  [+ |
6 h0 L( m0 e5 A! j* t第一个问题：
. }/ W/ X* D0 a9 A/ B1 k" b1 z& [. ]首先，孤雌激活不需要用融合液。核移植用融合液可以自己配置，成分很简单；. a7 |) R6 W8 ?; o  P
第二个问题：- R4 X% i1 j! a: s- O+ @
孤雌激活各种动物不太一样，但基本都能通用，你可以看看相关文献确定什么物种使用什么激活液。一般人上使用钙离子载体联合6-DMAP；猪上也可以用钙离子载体（或离子霉素）联合6-DMAP，也可直接使用电激活。$ R* ?* _2 _$ j; s$ c; U
第三个问题：
- J* b+ K/ Z; r2 j7 M电融合液中会使用甘露醇，是水溶性的，一般严格按要求配好就OK，不需要再调。

st_oliver

回复 xiaomingxu 的帖子- N6 p4 K3 B: w- C& d

5 s6 V0 K. ]1 _1 Q/ a8 ]谢谢你的帮助！0 I+ R( V' P& j2 ^+ q$ i
我之前激活用的都是电激活，用的是ECM 830（BTX），0.5mm 槽，融合液用的是Cytofusion Medium-Formula C，只是最近这段时间，很难拿到囊胚。很是郁闷。
2 T% B' w% L4 S8 q+ w7 Y我看了一个
) U% J% E) Z4 BECM ®  8302001 ELECTROPORATIONELECTROFUSION PROTOCOL" ^7 L+ r3 t# Y- j& j
其中融合液是0.3 M glucose with 0.05 mM calcium and 0.1 mM magnesium
0 b. n2 W% j  d& W- y3 ~9 Rions, and 10 mg/ml BSA.
7 x6 f$ @+ h7 n" f  b而我查的其他文献大多用甘露醇，或者是山梨醇溶液。

st_oliver

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3 n) X* [8 `. t
/ @3 z* @0 f2 i呵呵，谢谢啊

xiaomingxu

回复 st_oliver 的帖子' `0 f8 ^" v' Y6 U: r
0 l  h9 \; V+ |$ R# R5 g
我看你用的融合仪和融合液都没什么问题啦，可以从你使用的胚胎培养液找找原因，或者卵母细胞质量，如果都没问题，那可得做质控实验，是不是培养箱出问题了。

st_oliver

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) Y+ @- M! I( @
* w$ N, G# I; v1 p2 L好吧，我知道了，谢谢你！以后多交流！

xiaomingxu

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4 m* }5 e, c! z8 r+ K! X2 t+ q6 ?* D" @
我看你用的融合仪和融合液都没什么问题啦，可以从你使用的胚胎培养液找找原因，或者卵母细胞质量，如果都没问题，那可得做质控实验，是不是培养箱出问题了。