hiPSCs分化心肌细胞的消化

spongezhao

本人正在做hiPSCs的心肌分化，出现beating clusters后要如何把它们消化下来做膜片钳或者流式呢？
- G, ^% U( b5 K0 k, H是像挑克隆那样把它们挑出来消化，还是整个孔全部消化呢？
" x$ P& H2 K( c8 t! F2 N分化效率不高~* v' D+ }/ B- ]
求指教~

ciweiyuan

分化效率不高，你就把它挑出来消化

spongezhao

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0 u0 q& }; r+ H, `" k" B7 x5 _- P2 p' g' _) w
谢谢~请问用什么消化液消化比较好呢？0.25%的胰酶/EDTA可以吗？
6 S( }2 S' Y) d; l, ]! Z- C怎样的消化方法比较合适贴壁做膜片钳呢？非常感谢~

智露

请问你做过小鼠的胚胎干细胞向心肌细胞方向分化吗？

spongezhao

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! `5 U, ?, N# D& u  l. q* |# U2 _- f8 b- o5 l! L$ g) y) b, ?
没有专门做过呢~
4 N1 g# C1 j3 x不过在其他分化过程中经常会遇到跳动的心肌细胞，中胚层随机分化成心肌细胞的概率挺高的应该。+ P4 Y, ]0 w/ b# B1 W! D! p
用悬滴法悬EB，然后贴壁培养，其中添加适当的细胞因子，分化效率应该会不错的~

智露

回复 spongezhao 的帖子$ B. u& ]8 \  f# q) }" \" f
$ z) v" _8 [' X, L
你经常遇到啊？请问你用多少的什么血清啊？我也是悬滴法形成EB，可是悬浮下来看的EB一点不圆，你知道我主要原因是什么吗？好像细胞边缘分化的比较多而且容易散。求教，谢谢！

spongezhao

回复 智露 的帖子  k3 l! b8 _3 s2 _9 Z! ^
) A0 N2 ?: \/ G6 `9 x
随机分化过程中是会碰到的。0 o! [7 j" Y) y
就是平时用来养mES的培养基不加lif，15%gibco的FBS
) }; |; R/ q2 ~) w: f; `9 EEB的状态和本身mES的状态和起始细胞量有关吧。

spongezhao

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3 S' {2 E6 P$ ^$ }* K. B9 O+ `% {3 Y8 L6 K8 `5 G
随机分化过程中是会碰到的。8 m! u: O+ a2 B. g2 Z6 N# q, X- A
就是平时用来养mES的培养基不加lif，15%gibco的FBS+ P7 J9 `4 `& K# j# I
EB的状态和本身mES的状态和起始细胞量有关吧。