有哪位知道哪种细胞裂解液比较好，需要保持细胞内蛋白活性 - 实验室综合讨论区干细胞之家

查看: 26234\|回复: 2	go [请教] 有哪位知道哪种细胞裂解液比较好，需要保持细胞内蛋白活性 [复制链接]

Rank: 2

楼主

发表于 2013-10-6 22:01 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

有哪位知道哪种细胞裂解液比较好，需要保持细胞内蛋白活性，还有我们想做真核细胞的蛋白纯化，蛋白实在细胞内的，带His tag蛋白，谁知道有比较好的纯化试剂盒

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 1	+ 5	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1 包包 + 5 查看全部评分

回复引用

Rank: 2

沙发

发表于 2013-10-7 12:49 |只看该作者

1.比较温和的细胞裂解液有非离子型去垢剂Triton X-100，脱氧胆酸钠和NP-40等（使用时的终浓度在0.5%---1%），
2.比较温和的两性去垢剂有皂素和CHAPS等，7 {# v# S8 w j
3.要保持细胞内蛋白活性的话，尽量不要使用离子型去垢剂，比如SDS等

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 10	+ 20	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 10 包包 + 20 查看全部评分

回复引用

Rank: 2

藤椅

发表于 2013-10-7 13:47 |只看该作者

保持细胞内蛋白活性的话:
1.不要使用离子型去垢剂，比如SDS等
2.裂解细胞尽量在冰上进行! t) S* V- h+ s- C' G; {
3.裂解液尽量提前预冷
4.加一些蛋白酶抑制比如：PMSF,Pepsin，Leupeptin，Aprotinin等
祝好运！

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 5	+ 15	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5 包包 + 15 查看全部评分

回复引用

[请教] 有哪位知道哪种细胞裂解液比较好，需要保持细胞内蛋白活性 [复制链接]