求教求助转染24h后却出现漂浮现象，很严重，这个是为什么？？

fwyou

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  D; f- u# R  f- J) u2 c大家好，能帮忙分析一下，+ \! J$ E! p+ H, a9 [8 z
293T cell 用Lipofectamine™ LTX with PLUS™ Reagent 转染后 12well的 corning 板子，但是转染24h后却出现漂浮现象，很严重，这个是为什么？？  U! B1 a! ^# l2 w) m) i

; J3 C  |: ~! r7 T2 B求教了

shihuijunm

在plate293之前，先用0.1%明胶或PDL包被平板0.5h以上，再传293T细胞，293T贴壁不牢，换液要小心

yangcy-smile

你好，请问漂浮起来的细胞是成片飘起还是大多成单细胞或者团状，没飘起的细胞状态是否正常？

细胞海洋

回复 yangcy-smile 的帖子, o" i. A. [) ~: ~9 l

3 ?5 q7 S, G* k你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样  [5 w+ Q* S1 d% c- u$ _% N
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否则他会看不到

cheetah2020

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) C4 v# _. Y& Z+ \$ Q' m
+ b3 O4 a! o3 {/ E0 x转染试剂对细胞都有一定的毒性，先试一下剂量吧。另外前面童鞋有说239贴壁不牢，没使用过不知道，做个对照看看（不加Lipofectmine）。

zpzp0312

一定要用明胶包被6 j; y% p2 g' c0 u+ {3 ~  L
另外最好用大一些的板子做，因为293细胞铁壁不牢是众所周知的，你用12孔板难免在加液过程中将细胞吹松动
! C4 t* B2 B# f/ }# ~用大板你加液时可能只是把一个部位吹松动，其他位置还是相对牢固的

yangcy-smile

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$ y$ b5 N& l2 ]3 k8 m7 n2 I
4 D9 H$ L( A2 `, N+ ]5 I) `谢谢提醒 我以为直接留言就算是回复发帖者的问题了呢  下次会注意的

yangcy-smile

回复 fwyou 的帖子# z- G0 c9 X+ _+ J. {

8 T" ]3 M1 z8 _0 k" M* m1 ?1 a/ \你好，请问漂浮起来的细胞是成片飘起还是大多成单细胞或者团状，没飘起的细胞状态是否正常？

hbs08230

Lipofectamine 的毒性略大，在加入时一定要先有缓冲页面同时drop by drop 加入含有Lipofectamine的培养液，还可以考虑16hrs时换培养液。
# h7 m7 K- y* p3 t, A7 r: S也能用先灭菌过的0.1%Galatin coating板子，37度2小时就好，coating过夜的也能用。