求助：miPS的RNA提取

ligangtiancai

RT，求高手指点，miPS在提取RNA时如何去除MEF？

wwy551

回复 ligangtiancai 的帖子9 y& d+ L6 H% H  r9 _6 q5 I

+ E* p# r0 {; k本来想说可以用干性marker区分MEF和miPS，然后用FACS分选出 miPS细胞群。这也是很常规的从一群细胞中分选特定亚群的方法。楼主是不是可以考虑一下直接在显微镜下挑克隆，尽量挑取克隆最中间的部分，以防MEF污染，克隆周围的部分舍弃。再用小提RNA的Kit提取即可，这个对于细胞数目要求不高，而且相比FACS简便。

shangchunhua

楼主可以根据IPS和MEF贴壁速率的不同将它们分开

Yedan

b. 诱导多能干细胞传代7 c( k) J% X1 G7 I5 R0 C
取60-mm培养皿 每个加入3 ml 0.1%明胶溶液，37℃包被30分钟以上。
- D$ Q; H; g; k  Q7 Q  d8 I' P吸掉培养基，加入PBS清洗一遍，每个60-mm培养皿中加入1 ml 0.25% Trypsin，37℃孵育2分钟。
% R; R0 b' m2 e+ W) T# c0 K加入2 ml DMEM 培养基，用1 ml 枪头轻轻吹打3次，将细胞悬液转移至15-ml 离心管，1200 rpm离心5分钟。  @2 m: _: p0 O( x( ?
吸掉上清，用4 ml KOSR-DMEM培养基重悬，转移至明胶包被的60-mm培养皿，37℃，5% CO2培养，让滋养层贴壁40分钟。2 {" c$ h/ P7 y# w8 u# j8 s0 K
将60-mm培养皿中细胞上清转移至15-ml 离心管，1200 rpm离心5分钟。
. n- m( F: e. v. N+ P" k+ _吸掉培养基，用4 ml KOSR-DMEM培养基重悬，按照1：4的比例分至3个铺有滋养层细胞的60-mm培养皿，37℃，5% CO2培养。; d5 Z& N- e) h$ G4 p
将就一下吧，我本科的时候写的，基本都对