求助，hiPS诱导EB逐渐消散!

ligangtiancai

如题，我的hiPS在悬浮诱导EB后开始逐渐从边缘脱落，3天后基本上就全散开了，很是郁闷。。
, l) O$ L' S% _. _  G
. H  Z$ E+ _9 [问题如下：
. @" c( S0 r- J     1 EB逐渐脱落散开的原因？! \/ \! A# \( N0 p8 X
     2 如果是支原体污染，如何检测和去除？4 w1 R! V5 O8 D9 V; [
   1 x  R8 ~4 y! l: O% j
                   谢谢！

bio-bin

回复 ligangtiancai 的帖子) b+ ~% i  ~% Q5 b- s- C, \1 O
) |7 |& Q  l$ @. U! F# ~
我也遇到同样的问题。我想请教一下，你用的EB培养液是什么?（DMEM/F12+20%K-SR+1%NEAA+1%Glu+2mM βME? 还是不用k-SR，加血清？)，另外你的hIPS形成EB前是维持在有饲养层上，还是在matrigel上？

ligangtiancai

回复 bio-bin 的帖子2 ~$ E2 T. j5 N6 }" i- y/ U
. B: [& E7 R7 j2 E
做EB时用的是MEF的培养基， 高糖DMEM80%（PAA）+FBS（PAA）+1%NEAA+1%L-Glu。EB是悬浮培养的，接种前去除MEF

jefferson

建议换二楼说的培养基试下，不过用FBS替换KSR，即DMEM/F12+20%FBS+1%NEAA+1%Glu+2mM βME，也就是EB20培基。
  U0 T. x" l( t! h
% k; T* m5 e: l, b7 c2 J另外，如果有支原体污染，直接丢吧，基本没办法去除的。即便加药，效果也不好。

ligangtiancai

回复 jefferson 的帖子5 L/ h5 G4 q% ]
2 }2 I$ x3 j1 T% _8 j, q* ?  C; h
恩，我试下，请问你用的FBS是什么牌子的，是否是ES-qualified的？谢谢

jefferson

回复 ligangtiancai 的帖子
+ o( v8 f8 ]$ ?5 M7 b4 p  k: I  q0 n7 ]+ [% Y1 T) S" h) O
GIBCO

echoxy1020

回复 jefferson 的帖子/ O2 b. V9 |8 a  q! Y

0 D4 x$ O( j  ~1 r5 V/ R' m, b  y请问一下为什么建议用FBS替换KSR？有什么区别吗？

wangxiang

支原体检测可以用PCR的方法，清楚推荐sigma的BM-CYCLIN。如果不是重要细胞，建议就直接扔掉吧，杀的周期较长。