大家看看我的人胚胎干细胞分化否？

dabai22222

右下有些分化，feeder稀且状态差，而且colony已经长很大了，两三天前可能就可以传代了

song58

回复 bigsnow55 的帖子/ A" k7 I) U9 L0 v: `4 r% G$ R
; h- M6 s5 \; S5 ~) h
兄弟真是有心人，问题考虑的周到。7 f) m$ H# ]$ y' T! N
我记得DF12里是有HEPES的吧，不过从没测过培养基的pH...

bigsnow55

回复 zpzp0312 的帖子0 F: g) n: D* i3 Q9 H

2 z: H" n9 v: I谢谢！不知道是不是分化的ES生长得快些?  z# r/ c! A% k3 u
我每次一传三，3-4天后克隆就长得很大，需要传代了，很累人。

lixf

边缘部分分化了，可能是feeder比较稀的缘故，人的ES对feeder的要求很高，所以在传代之前必须保证feeder的质量
+ Y0 L* J$ N, Q: U建议把边缘的细胞弃掉后在传代，若克隆不够传代的大小，可以用条件培养基培养。

salomemao

好多高手，学习中

flyingatom

1、边缘的细胞貌似分化。但有时候克隆长得比较大的时候边缘和中间的细胞形态稍有差别。# c9 E$ h' R8 `% ~0 v& X
2、尽量用进口的D/F12 medium，如果用KnockOut的会更好。试过国产gibico的，效果很差。
. @5 M: r+ n- p$ G0 y% @, c3、不知道你传代用的是什么方法。如果用胶原酶传，可能传代中有的克隆比较大，所以生长迅速。如果用机械传代，一般不存在这个问题，除非挑的克隆太大。; S( i0 F% R6 _( f) `- m2 {
4、尽量不要让克隆长得太大，否则克隆中间部位细胞会死掉，边缘易分化。
0 E9 @+ z: ]2 T2 z% @) R2 H3 _( Z5、分化的hESC体积会变化很快，但这种情况下形态变化很明显：核质比变小，出现明显的细胞边界，细胞变成成纤维状等等，很容易分辨。$ {" `$ h( O3 i3 y& T) Y* b
从你的图片来看，结果还是不错滴，注意一下前面的高手们的意见，可以养出理想的hESC。/ p7 [2 I6 t& y* C, p
Good luck！6 |; Q$ [- ~& S% X

bigsnow55

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* F3 D: H. b" w2 X多谢指点！