关于培养中的真菌污染？

happyending

细胞培养中污染时最头痛的了，细菌污染一般培养基会发黄变成像果汁一样的那种颜色，在相差显微镜下也难判断是什么细菌污染，最近在看一些帖子说，真菌的污染时，一般培养液是清亮的，而且真菌生长叫细菌慢，我想问下有经验的同志，一般真菌污染了多久才能发现呢，一定要等到长出菌丝才能被发现时真菌污染？谢谢！

nydfy

首先要尽量避免可能污染的途径，其次，可以加抗生素抑制微生物生长，参考下表：* p' n6 q0 Y4 U. N1 ^
抗生素使用种类与浓度： + l* S/ ]5 `3 ]  k9 j/ {$ t
                          工作浓度        储存温度        杀灭细菌: {* V: u4 W' X9 N6 ^+ c( U
penicillin                         100 units/ml         -20℃        G( ) bacteria! A; y+ }/ H. f: W2 C2 ^
streptomycin        100 ug/ml         -20℃         G( ) and G(-) bacteria: M+ f$ ]! K; K+ Q$ C, x
chlotetracycline        50 ug/ml                        - 20℃     G( ) and G(-) bacteria
: C5 }: Y5 Q: W' T" p8 @: vgentamicin         50 ug/ml                        -20℃        G( ) and G(-) bacteria, mycoplasma
' e" H& }* F1 G- @5 |% lamphotericin B         2.5 ug/ml                        -20℃        yeast and molds , k: K' e0 j. g) T
nystatin        50 ug/ml                                         -20℃        yeast and molds! k. r, k0 n- y# G4 k( f: E
fungizone        2.5ug/ml         -20℃         yeast and molds  L' m8 {* I4 ?$ C

ljzmy82

应该是等到长出菌丝的时候才能看的比较明显，一般说来真菌污染不会立即产生毒素杀死细胞，而是随着培养时间的延长，真菌逐渐增多，当其数量足以和细胞抗衡的时候，细胞才开始死亡，真菌污染是件很麻烦的事情，一旦发现时真菌污染要重新消毒杀菌培养箱，以免残余的孢子会继续污染，以至于整个实验室都是孢子的气溶胶

deron

果汁一样……
5 |# y4 ?5 {8 _基本是长出菌丝后才会发现，甚至由于真菌初始阶段对细胞损伤不大，有时候瓶里长出菌落，没有仔细看还发现不了

happyending

恩恩，谢谢大家分享经验

清影

回复 ljzmy82 的帖子4 x; L3 j( A/ f! M" W5 B7 C9 c8 P* x
- ~6 n) W* H2 R9 p% _+ e5 E
顶！允许的话可以使用两性霉素B或者抗霉菌素以防真菌污染

kingchen81

如果是实验研究的话，可以加抗生素。一般的加双抗，如果是做大鼠的话，其实加庆大霉素效果更好。因为经常是肠道的阴性杆菌污染，庆大效果更加，而双抗反而效果不好。霉菌可以用两性霉素B。
  T* M. B7 H+ p! o& K# T7 V: l! {如果是临床应用的话，使用这些抗生素就要慎重了，因为难免病人有抗生素过敏的，所以还是尽可能的在培养的过程中注意无菌操作。
& I+ L: f+ z( X7 P" E# X其实细菌污染比较好处理，扔掉就OK了，而且其实只要经常仔细看的话，在显微镜下是很明显的。（当然本人原来是学检验的）。霉菌的话，霉菌孢子仔细辨认还是很明显的。空气中要好好消毒。不要存在侥幸心理，觉得一批细胞还只发现1瓶，其他可能没事，继续操作下去可能会全军覆没。+ V5 [. Y+ h6 W" g
其实还有一个严重的是支原体污染。那是看不见的。往往要一个星期左右才会发现，已经晚了。
" C+ V' r. \( F( |" I所以最重要养细胞还是要养成良好的习惯。无菌观念时刻在心。

柏林小杨

回复 kingchen81 的帖子) {9 W9 x$ [. _2 }/ j0 t

: p* S: A7 h. ^, `! q8 d感同身受啊
% M. s3 y" U5 j; @1 _9 B