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[请教] 电泳出现严重拖尾现象 [复制链接]

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楼主
发表于 2010-11-25 10:53 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
这几次用的前一段时间提取的质粒电泳老是出现拖尾现象,难道是质粒破碎?纯度不高?  b. R& W8 x) O' n- j& q
大侠赐教!!!
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沙发
发表于 2010-11-25 11:29 |只看该作者
拖尾应该和很多因素有关,电压太高,质粒结构破坏,纯度低、点样有没有漂,缓冲液是不是污染了,胶的浓度是不是低了等等。
/ @' a; `" T2 i% N, [2 j8 k具体是什么原因就要看你的实际操作情况了。
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藤椅
发表于 2010-11-25 11:37 |只看该作者
我也出现过这种现象。我后来换了一个试剂盒就好了。
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板凳
发表于 2010-11-25 11:43 |只看该作者
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拖尾是电泳常见的现象7 u. f9 p$ Q) K/ t( L
最大的可能就是质粒结构被破坏,质粒杂质含量高,电压过大- p3 O$ U' y. V/ K3 O1 A+ a
你先排除一下电压
! d$ l3 Q" T, k* m然后在正常电压下稍微多跑一段时间,观察拖尾现象
. _# E4 u" D# X1 L1 z要是拖尾的出现分层的话就是质粒纯度不高,要是拖尾还是紧紧跟着质粒的话,估计就是质粒被破坏了。
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报纸
发表于 2010-11-25 14:39 |只看该作者
谢谢各位大侠赐教!!!

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发表于 2010-11-26 13:16 |只看该作者
一般拖尾现象的出现个人认为与你质粒提取试剂盒有关,不知道你是否做过粗提,粗提的时候就会有很明显的拖尾,那是因为你收获的质粒纯度不够,产生了RNA拖尾现象,所以建议你换一个试剂盒,如果不想换的话建议你加大RNase的用量,尽量降低RNA污染
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发表于 2010-11-26 13:38 |只看该作者
1NA的浓度可能比较高,稀释的倍数要再提高点5 p( \2 A( Y3 T/ D" v) M& A  b/ I
2:电泳缓冲液中可能会有RNA的污染,去RNAse去除
6 T- l4 H0 T/ b" N' Z; Y* X3:样品来源在去掉RNA的步骤中,RNAse的量可能不够,要多加点.
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发表于 2010-12-2 08:03 |只看该作者
如果是向点样方向拖,那可能是点样浓度太高,或者质粒不纯。, k+ j* m  E" {6 f+ E
如果是向反方向拖,那恭喜你,你的buffer中有DNAse.
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