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楼主: quduck
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帮我看看我的MEF出了什么问题?(附图)   [复制链接]

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发表于 2010-7-22 22:15 |只看该作者
MEF是买的,密度大概是六孔板每孔2*10E5,其实ES传代前MEF的状态时不错的,传代后密度就很大了,状态也不好,考虑和MEF本身关系不太大,不知道有没有其他可能原因?
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发表于 2010-7-23 09:54 |只看该作者
学习一下。

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发表于 2010-7-23 14:09 |只看该作者
饲养层的问题,需要重新做MEF,不知你是否用丝裂霉素C处理的,如果是,一定是丝裂霉素有问题!
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发表于 2010-7-23 18:00 |只看该作者
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你的feeder状态太差了,ES细胞不可能账长好。
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发表于 2010-7-23 20:12 |只看该作者
我上个月出现的情况跟你的一样,最后一步步检测最终解决。首先,你说MEF在接ES前状态比较好,建议上传一张看看,MEF未接ES前是否有游动黑色小点?细胞碎片多?如都没有的话,应该不是MEF的问题;其次,如果接ES后才会出现小黑点,细胞碎片多的话,就要考虑是否ES已遭到污染,如复之前苏冻的健康的ES都出现这样的问题的话,则要考虑ES培养液的问题了。1 ]# D9 X) i# e' `6 E
    出现这样的情况个人觉得最可能的是丝裂酶及血清,建议别购丝以及将纯血清置培养箱培养,隔天观察是否有问题。
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发表于 2010-7-24 09:23 |只看该作者
谢谢楼上的同志们,我改天上传一张MEF未接种的图片,并打算把血清培养一下看看。非常感谢!

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发表于 2010-7-25 17:32 |只看该作者
有可能是支原体污染。我们曾经养的干细胞状态一直不好,后来用消灭支原体的药物处理一段时间就好了。P.S.据说国内的好多干细胞都有支原体污染,大家在养干细胞的时候一定要时刻注意。市面上有检测支原体的试剂盒,可以先检测一下。
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发表于 2010-7-26 20:39 |只看该作者
最近我把血清浓度提高了一些,干细胞长得还可以了,不知道为什么

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发表于 2010-7-27 15:28 |只看该作者
有两个原因:1.饲养层细胞活力低1 J: P3 L* N' q2 B
            2.有可能是生长比较慢的细菌存在培养基里面(例如很低密度的真菌会长几天后才能被明显观察到,在这之前细胞生长状态很是不好)
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