小鼠间充干的一些细节问题

missyoudad

1   消化的时候0.25%,8min是不是太长？但是小鼠的间充干贴壁很牢？过长消化的后果是什么？细胞活性下降？, m7 q4 v$ Z' C7 Z; a
2   培养期间，如更换其他的培养基，会不会影响其扩增？# V& F6 b$ k. _* C8 Q- R
3   DMEM-LG与α-MEM哪种比较适合小鼠？FCS的浓度选择10%或15%？

烂桃

1很长，贴壁过牢的细胞可能老化了，消化时间过长会使细胞活性下降$ M. Q! Z0 D( P2 c+ e
2会- [0 T' e8 _1 L5 H: b( A) W8 J
3α-MEM，15%FBS0 N7 I! g( c/ Y) c
以上只是个人经验，仅供参考

5784630

1.一般外文文献上都有建议用酶消化时间不要超过5分钟，如果是不容易洗脱下来的贴壁细胞可以放入37度恒温箱，用枪头移液轻轻吹打。1 s. N' O( D" Q: M5 y
2.MSC具有较强的环境敏感性，除非你换的培养基非常之好，否则一般不建议
+ ?8 |3 n0 P, _0 c8 G3.LG-DMEM的用的比较多，至于FBS的浓度，可以在实验中自己摸索，一般原代培养用的FBS浓度要稍稍高一些，但是在传代后，会降至10%。

duanduan48

1.消化时间太久还没下来的不一定是MSC，给你一篇09年nature protocols上一篇文章看看，这种方法原代帖壁细胞只消化2min--，你还可以找其原论著看看，我就不发了。
5 \' R* ?9 R9 E/ B9 ~! V2.培养基还是不要随便换为好
: n: J: r( Y# _3 v6 e$ H! J3 q9 E3.DMEM和α-MEM都有人用，FBS10%和15%也都有人用。但是有报道说15%更容易促其自发分化。还是10%的DMEM见的比较多吧，我用的是这个方案。

missyoudad

谢谢大家的宝贵意见。收益多多。再次谢谢。

why121

我也有些想请教的 例如小鼠品种性别年龄的选择 原代接种的密度（25cm2的瓶子应该接种多少细胞?) 首次换液和传代的时间大概是多久，到底差速贴壁和差速消化具体的是怎样？MSC的特性是易消化和易贴壁吗？传代接种的密度应该多大 有事一味的1传2 结果细胞少的可怜 又要2:1来接种 很郁闷啊 望高手们指教