MEF复苏后不贴壁的原因？

he_liang

你的冻存液有没有问题啊？始终觉得就是冻存时的处理不当造成的，或者说，冻的时候细胞原本就不好？还有你的冻存方法也可能有影响

sacia

个人觉得，应该是冷冻的细胞状态不好所致，要是细胞状态好的话，很容易养的，MEF贴壁能力挺强的。

jsy

冻存管37度水浴后直接加入到5ml的完全培养液中培养吗？那冻存液不是还残留在培养体系里？可以尝试在用DMEM稀释冻存液后离心弃上清，然后再用新鲜培养液重悬接种。此外，毫无贴壁细胞极有可能是你冻存时出了问题。冻存一定要迅速。

ssuwhite

复苏后不必非要离心吧

sniper

解冻后计一下数，在用tunel染色看一下是不是细胞出问题了

yezi_830823

我也有这样的问题

sniper

我最近也遇到同样的问题了，我感觉有可能是细胞冻存时出现了问题；再有就是培养基的更换；至于你的问题可能和我不太一样，看看是否培养条件发生了变化，比如说co2，温度，是不是培养箱污染了等等

zhbshi998

MEF细胞复苏的时候动作要迅速，因为解冻后的常温下DMSO对细胞是有伤害的；还有就是原代细胞冻存后存活率相对低，所以冻存的时候细胞密度需要稍大一些至少10^6/ml冻存密度；另外有时候复苏不好很可能是冻存的时候就出了问题，所以啊这个原因是多方面的，自己仔细找找吧，祝你好运！

taoli10000

现在遇到同样的问题，请问楼主你找到解决方法没？传授一下下，谢谢。。。