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gscao

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楼主

发表于 2016-12-22 10:19 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

最近我们用质粒转染细胞，质粒为瞬转不整合到基因组中，3天后提基因组，PCR却能扩增出质粒序列。哪位大神能告诉用哪种方法提纯基因组，能排除游离质粒DNA的干扰。谢谢。

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zhu1019

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沙发

发表于 2016-12-22 13:54 |只看该作者

转进去的质粒若是通过载体构建转化大肠杆菌所获得，那么质粒会含有甲基化位点，提取基因组后可以使用DpnI消化一下，去除甲基化的质粒

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gscao

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藤椅

发表于 2016-12-22 19:39 |只看该作者

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谢谢，我试试

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gscao

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板凳

发表于 2016-12-23 08:01 |只看该作者

回复 zhu1019 的帖子* I6 R9 d/ y) ~
0 T! r$ R/ Q' c% c0 y
刚看到这个建议时觉得不错，但仔细想想，可能不行。因为我们提基因组后，要用PCR对基因组进行扩增，即使DpnI将质粒消化成DNA片段，质粒还有可能被扩增出来。另外，基因组中有更多的DpnI位点，需要加多少酶才能消化完全，毕竟DpnI酶并不优先消化质粒上的位点，质粒如不被消化没切掉，PCR依然能扩出来，所以，你的方法可能不行。不过还是谢谢啦。

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