药物筛选富集肿瘤干细胞后检测SP的问题

yafeu

各位老师，我想先用化疗药物富集肿瘤干细胞，然后从加药起四天后用流式检测富集后SP的含量(中间换两次液，加药两天后换一次，换后再加药，检测前晚上换一次，换后不加药)，有个问题请教一下：我用顺铂做了五个浓度梯度，在五毫升的培养基中，分别加入1-5微克的顺铂（化疗药），隔天观察到1-2微克死细胞较少10%，3-4微克40%,5微克死细胞90%，请问我下面应该怎么操作啊？（之前检测过未加药时SP含量是10%）。我自己觉得5微克浓度的细胞快死光了，换液后还剩10%的细胞了，状态也不好，而且这样的细胞密度也长不起来啊，这瓶细胞可能没用了吧？（准备扔掉）可是另外有文献报道，加化疗药24小时后SP含量就可以增加10倍，这个可能吗？我就是不明白，比如SP含量原本是10%，如果真是增加10倍，那就是100%，那是不是他准备了很多细胞，加药后非SP细胞都死了，换句话说一瓶细胞死了90%，然后拿剩下的10%细胞去测SP.是这样吗？（我有个朋友试过，24小时没什么变化，不过他加药浓度低，加后细胞死亡较少）而且还有个问题，就是检测SP本身就要求细胞状态要好，不然SP可能测不出，可是加了化疗药后，所有的细胞状态都不好了。这样状态不好的细胞去检测SP能测出吗？总结一下，就是问加了化疗药后SP细胞增加的原因是：1.非SP细胞死了引起SP细胞含量相对增加，绝对量没变，2.还是加了化疗药后，非SP细胞转化为SP了，绝对量也增加了啊？谢谢

passenger101

ABC transporters works as enzymes. They may be sturated in high dose of 顺铂.  It's not a good idea to enrich SP with high dose drug.  I would suggest use concentration to achieve ~50% cell killing and repeat for 3 rounds (mathmatically 8 fold enrichment) or more. Good luck!