胎盘间充干的产量有多少？谢谢

willow0711

做了几次，胎盘小叶分离间充干细胞，总是存在两个问题，污染和产量低。9 ~: k3 @% w6 j/ K0 J9 x
1、之前发贴请教各位大侠，我用含4种抗生素的PBS清洗，也用75%的酒精反复洗了3次，但是没什么改善，还是细菌污染了，无奈啊！不知道哪位做过的大侠可以分享下自己的经验呢？; c; e% o5 D) R; M; W9 k! m
2、还有个问题就是产量极其低，想问下有经验的大侠，你们分离的时候，一般分离多少克？得到的细胞可以铺几个25T培养瓶？或是几个孔板的孔？谢谢了！

sdudai

同楼主，我也想问一下各位大侠，怎么避免污染问题，我做的胎盘小叶分离间充干细胞也是经常污染。

uslzhang

回复 willow0711 的帖子) P. R1 c' k* d( u$ [
8 r9 C0 m, J3 S$ h3 [
楼主不是存在什么理论问题，而是操作过程的技术存在问题，建议练好手艺，严格操作，去其它实验室观摩别人成功的操作规范程度。

willow0711

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7 u  U. p8 `+ a; {4 q  w% X! ^$ S( f
哦，只是没有这样的实验室可以去观摩啊

cantonchn

8 o0 m# r" x0 e, I

1 j: F' t  @; q胎盘提取MSC污染几率很大，远不如脐带。
! ^$ H* t4 }2 F" l+ x/ c0 |- ~: r+ Q, X: r$ e' ~* {
并且胎盘中含有大量的前体MSC（即MSC的未成熟状态），这个东西个别公司称之为“亚全能干细胞”，目前尚无证据表明此干细胞与MSC有何本质的区别~~~

piano尤尤

所获取的胎盘本身来源的污染 这一点一定要尽量避免 如果开始就是无菌操作 那后续就基本不会有太大的问题
1 w9 j5 U# r& R5 K5 G: K$ A8 g9 C运输过程不要太长 取到标本后 封口运输
8 V/ W2 [# P. Z+ c. G% D/ l我所做的胎盘基本上是从产妇生产到实验室就一个小时0 X7 H; a$ n! C7 s9 w6 K, H- l4 b
清洗就只用双抗 没有用过酒精- Q9 X6 }4 q" g
做了几十次 就一次污染' u6 U2 |0 z2 e& P8 p1 N5 K
关于产量的话 你可以试试第一次消化贴壁的细胞的培养基 可以再次离心贴壁
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单个核细胞

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+ ^2 S) ^' f5 i) k8 P2 f3 }  G9 c; L0 g# {+ K' d8 f& \
胎盘放在加有双抗的采集液里，分离的时候剪取5-10ml，漂洗去除血凝块，剪碎后加入酶消化，过滤去除未消化的小块，滤液用Ficoll分离取白膜，洗涤白膜后接种培养。5ml胎盘小叶处理后所得原代细胞应该可以接种一个T25瓶。
6 Z/ l! {3 J  ~- b$ ]. ^1 B6 O" y; A* x" b2 h# T+ G" `0 j
注意几点：' R$ ^  R* c- S, {  G0 O
1.盛放胎盘的器具应首先做到无菌；
: B% ?5 `' n* O& L2.采集液加入抗生素；
; G- z/ Y& V* Y3.分离操作所需的手术器械、一次性耗材、试剂均应保证无菌；
' Z4 Q9 A, n9 j  N+ a+ O* n& K4.建议使用一次性细胞筛网；" s; z( \: }; C0 s- A2 \6 l$ I
5.注意无菌操作。

willow0711

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; r' H( D  o0 ^$ T( `3 K; W哦，谢谢& t% ?: F4 }. v* G" g* W& t
每次都是人家装到袋子里面后给我们，不允许我们把无菌器皿带进产房！

willow0711

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7 [. H, m; H$ m/ ~8 \6 v8 e1 L) k; ^恩，谢谢

cantonchn

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% E: G$ ^+ [7 {# d! d0 D  b( n
/ {) f$ c- T  t- u( Q8 p5 e那污染的可能性就大了~~
7 N6 v4 p9 f+ ~# ~% i, O