胎盘间充干的产量有多少？谢谢

willow0711

做了几次，胎盘小叶分离间充干细胞，总是存在两个问题，污染和产量低。
& ~+ b1 X! ?: V1、之前发贴请教各位大侠，我用含4种抗生素的PBS清洗，也用75%的酒精反复洗了3次，但是没什么改善，还是细菌污染了，无奈啊！不知道哪位做过的大侠可以分享下自己的经验呢？
1 {& j1 h6 K  D  r3 f6 d7 t2、还有个问题就是产量极其低，想问下有经验的大侠，你们分离的时候，一般分离多少克？得到的细胞可以铺几个25T培养瓶？或是几个孔板的孔？谢谢了！

sdudai

同楼主，我也想问一下各位大侠，怎么避免污染问题，我做的胎盘小叶分离间充干细胞也是经常污染。

uslzhang

回复 willow0711 的帖子' x# K( K1 C" [
; w2 X/ O% d+ a
楼主不是存在什么理论问题，而是操作过程的技术存在问题，建议练好手艺，严格操作，去其它实验室观摩别人成功的操作规范程度。

willow0711

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$ Q: M% v! |0 E: T/ `2 e" [/ Q- D* q* G0 u, e
哦，只是没有这样的实验室可以去观摩啊

cantonchn

9 J: n: t$ E( c6 H: C0 e
1 D/ z, W( v7 e- ~2 ^( K4 d胎盘提取MSC污染几率很大，远不如脐带。* k8 L5 J8 h- r

/ l5 U( a. I$ s% K) M并且胎盘中含有大量的前体MSC（即MSC的未成熟状态），这个东西个别公司称之为“亚全能干细胞”，目前尚无证据表明此干细胞与MSC有何本质的区别~~~

piano尤尤

所获取的胎盘本身来源的污染 这一点一定要尽量避免 如果开始就是无菌操作 那后续就基本不会有太大的问题6 T, F# i& B+ ?" |
运输过程不要太长 取到标本后 封口运输
2 _; o# ?& D1 J/ R' X% b8 j2 a4 h5 l我所做的胎盘基本上是从产妇生产到实验室就一个小时1 f* J8 Q3 y) M- q- K7 a" I
清洗就只用双抗 没有用过酒精
% R- A' J. s' }; `/ D+ ?6 f做了几十次 就一次污染
; @  ]- N  ]; h( A. R' k: Y关于产量的话 你可以试试第一次消化贴壁的细胞的培养基 可以再次离心贴壁
, T( u: ~1 S5 a1 E7 I" H* u

单个核细胞

回复 willow0711 的帖子7 S% R0 b. q5 C  T
( [3 L) P7 R" S7 r* b5 R
胎盘放在加有双抗的采集液里，分离的时候剪取5-10ml，漂洗去除血凝块，剪碎后加入酶消化，过滤去除未消化的小块，滤液用Ficoll分离取白膜，洗涤白膜后接种培养。5ml胎盘小叶处理后所得原代细胞应该可以接种一个T25瓶。
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" J0 }' v% z5 B% p  Z4 |- G% N注意几点：* v1 d; {6 y9 S1 s1 r
1.盛放胎盘的器具应首先做到无菌；; Y- }, D1 ?$ N+ ~, e7 M$ `
2.采集液加入抗生素；
& X2 a/ k" j' b3.分离操作所需的手术器械、一次性耗材、试剂均应保证无菌；
; S8 \! e" r+ ?- w. G* M: Q4.建议使用一次性细胞筛网；
6 B' P* k, u) L* }6 D1 f5.注意无菌操作。

willow0711

回复 piano尤尤 的帖子+ r, v" _4 i" L$ V8 _
0 Y. l* y- T+ L. i  F& w
哦，谢谢
& \. E' N3 e6 }- y* L. A: O0 k" Q每次都是人家装到袋子里面后给我们，不允许我们把无菌器皿带进产房！

willow0711

回复 单个核细胞 的帖子  F/ X5 @) a# ]% l1 {
8 o' n7 `) A7 w, U3 A! }% X  e
恩，谢谢

cantonchn

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9 T; ~- p" u% E, r) d7 n4 J+ f
+ c* H4 X' B0 Q8 V( W' {那污染的可能性就大了~~' K# B- F# J- b2 [! ^6 [3 Y