关于细胞周期时长检测

Sakya

各位大侠，如果我想检测某种组织细胞细胞周期G1，S，G2，M四个期以及整个细胞周期的时间长度，请问需要采用什么实验技术？

knowtumor

经典的方法是，H3-TDR一次性标记，定时连续取材。制备切片，放射自显影。计数被标记的有丝分裂像的百分数。连续作图便可计算出。& \4 ^- ?) w% O# u' q: a5 L7 Y
" t# x9 v5 V9 W. }! W
FACS不能测。

Sakya

好弄吗？用核素标记核苷酸？

knowtumor

80年代和90年代初的时候H3-TDR还很多人用。现在恐怕没人用了，谁还卖？

Sakya

现在人们用什么方法检测细胞周期时长呢？？？

knowtumor

It is a lost art. 6 L! f( \. l  K2 \

Sakya

楼上能帮我设计一个简易的测定细胞周期时长的方法吗？

knowtumor

H3-Thymidine 可用BrdU取代。1 m, m2 R) C" Y, M) ]0 B; G

+ a* f/ ?% `; M2 X0 [比如小鼠肿瘤，一次性注射BrdU,间断取材。30 min, 1hr, 2h, 4h, 6hr,12 hr,24h, 48hr, 96h; 肿瘤的细胞周期偏长，一般在20-100hr。有超过100hr的。
) `2 h% p. T- _  T. e" \# h; l* g4 q. g# c: c- F
将各标本制备石蜡切片，免疫组化做BrdU染色。计算Mitotic figure中BrdU的阳性率。做动态曲线图，可计算出。
9 e( j4 K' y6 h1 V% n* D4 Y  Z+ z' j# s/ ~1 u  l0 U, S

Sakya

thanks

Sakya

能不能把现在的流式细胞仪改进一下，让它可以测定细胞周期各期时间长度？