大家帮忙看下人源MSC的状态吧。谢谢

michael1013

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7 l7 j$ C: w' Z8 s2 D9 ^* ~8 U, q! ^+ j8 i7 p# G
的确在传代后第2天仍然有大量浮游的细胞，并且我用台盼蓝检测过，几乎都是死细胞。并且但是传代时用的是10cm的dish。粘附的细胞密度的确比较低。$ V; [1 Z2 P: h: x8 ~- b. s" Q
是不是换6cm的会好一些

michael1013

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: e! R( D+ v, y+ r0 E# M
+ W# x+ s  s& l. V换液是隔天一换

sailree

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% ^# }! U/ e) h1 X5 q% ~/ u! T" S+ _/ D1 k: B2 c' j1 t" J/ e
血清的话试下DMEM+F12+10%FBS,密度8000~12000不过传到后面依然会出现细胞老化的情况

michael1013

回复 sailree 的帖子* z4 H" N( K; H
1 C+ E$ o, E, ~4 \
多谢多谢！7 X; t$ {" K/ r! \" u
是不是说单用lonza的这个培养液就可以了，不用往培养液里添加别的什么东西吗？/ ^1 E$ v4 k4 J$ a9 A4 }6 c4 h5 l
还有就是接种之前用不用铺gelatin什么的。还是直接就铺就可以

kyo000

貌似接种密度太低的话细胞就容易出现老化，跟代数高低没啥关系吧。。。
! U" U% w5 q! V1 H/ h( b! o不过一直用的是低糖的DMEM加胎牛血清，还真没用过无血清培养基，不知道养的怎么样。。。

zttamy

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; d7 n7 Z- d! s; N) n% f+ F5 ]$ y* t' k  G9 |, @5 }
跟代次还是有关系的，文献研究显示越往后传老化现象越明显

sailree

回复 michael1013 的帖子/ X2 A8 u- ?# c, R9 J* e' U* T
" D7 H, f& l1 G# q1 z- T3 c" X  H
直接用哈

caiyu07248

你复苏细胞的密度是多少？应该是密度太低了吧，复苏后9天了，细胞还那么稀，细胞太稀了也比较容易老化，建议复苏时的细胞密度最好比传代时密度高10%！

michael1013

回复 caiyu07248 的帖子, J' }5 J$ r; G* E
% R3 x) @; N7 p) W3 ]% |
复苏时候的细胞数是30000（10cm dish），但是有大量死细胞。估计有大概40%吧。& U, S& S) e& i6 i4 @; B) @. `
还有就是，因为这是从别人那拿的stock。刚问了一下，说是2年前的stock，并且一直在-80度保存。不知道这会不会有影响。% E: N& Q% A2 m* a3 @( h4 }( r! v
谢谢

zttamy

回复 michael1013 的帖子3 z$ ~; J3 E, ?2 e$ k" S
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-80℃都放两年啦？活性肯定有问题，液氮里放2年都难说