大家帮忙看下人源MSC的状态吧。谢谢

michael1013

回复 zttamy 的帖子: t, @( ]7 ^3 O/ {2 r- c' D

7 }# x2 g1 d$ [* J; X+ P# }* v的确在传代后第2天仍然有大量浮游的细胞，并且我用台盼蓝检测过，几乎都是死细胞。并且但是传代时用的是10cm的dish。粘附的细胞密度的确比较低。
5 [; S$ S* y$ U是不是换6cm的会好一些

michael1013

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! b, Q/ m+ z  @: B5 g0 _: d5 v- ~$ z7 x" E
换液是隔天一换

sailree

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9 u: T2 m7 N- i! W
& S: c: E5 F- L" n- T: O' p7 K+ V血清的话试下DMEM+F12+10%FBS,密度8000~12000不过传到后面依然会出现细胞老化的情况

michael1013

回复 sailree 的帖子  [# c; F- B9 `0 c3 Y3 \

; Z, u: K# X/ h( d多谢多谢！
2 q- O/ H0 B! A, w9 ]7 V是不是说单用lonza的这个培养液就可以了，不用往培养液里添加别的什么东西吗？+ u" E5 H& T1 H- |6 K
还有就是接种之前用不用铺gelatin什么的。还是直接就铺就可以

kyo000

貌似接种密度太低的话细胞就容易出现老化，跟代数高低没啥关系吧。。。
$ R% t! ~- M4 u+ i  H/ `不过一直用的是低糖的DMEM加胎牛血清，还真没用过无血清培养基，不知道养的怎么样。。。

zttamy

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4 j0 _( a! O8 J- u: t2 t" i
% g6 V1 Z) }0 u0 `$ n; C/ q7 k2 _; W跟代次还是有关系的，文献研究显示越往后传老化现象越明显

sailree

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* \5 o6 b  J2 i
; p' t9 \+ f6 N. P直接用哈

caiyu07248

你复苏细胞的密度是多少？应该是密度太低了吧，复苏后9天了，细胞还那么稀，细胞太稀了也比较容易老化，建议复苏时的细胞密度最好比传代时密度高10%！

michael1013

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5 p- I. d+ g2 Z* v. }! \% S. t" g0 O* f$ q/ o0 `/ G, i; t( B4 G4 W
复苏时候的细胞数是30000（10cm dish），但是有大量死细胞。估计有大概40%吧。
$ C" c* A0 r' j2 l2 y/ v: s) \) z还有就是，因为这是从别人那拿的stock。刚问了一下，说是2年前的stock，并且一直在-80度保存。不知道这会不会有影响。9 |5 Y4 H4 u7 n5 E7 ^, ?7 D! e
谢谢

zttamy

回复 michael1013 的帖子  E% N* D1 j" W" [; u6 a( T5 x

: f; j9 o$ j; t& e  a& z-80℃都放两年啦？活性肯定有问题，液氮里放2年都难说