逆转录病毒包装

huangcong1988

前面做逆转录包装，看到文献中报道，以及别人的经验是目的基因：Gag/pol：VSVG的比例为10:9:1，还有一种比例是8:4:1，我不确定哪种更好，因为有人说VSVG对于293T细胞毒性很大，所以，大都倾向于用前一种，但是，我摸条件发现，三种质粒共转293T的时候，比例为8:4:1的时候荧光最强，那是否这个比例是最好的呢？

akxiaoqiang

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- g# B$ Q  I2 }3 Q以前做过，不过用的是platE细胞去包病毒，用HBS和CaCl2，效率有80%-90%。

huangcong1988

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; `, A, h1 l, n' N$ c# z+ Z9 i' @5 S. y; B5 n6 O" r/ ]
plat-e的话就不需要包装质粒了，直接转目的基因就Ok了，我这个需要三个质粒比例比较好。还有就是plat-e这个细胞哪里买的？

huangcong1988

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, S$ K- {, P7 g. n( O
我之前一直在找这个细胞，找了好多地方，有的是没有，有的太贵了

akxiaoqiang

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& C5 G4 E5 Y3 \- p+ }
/ O6 R8 T8 L6 ?) p& Z$ V8 q: t是的，用这个细胞就不需要包装质粒，直接转。一些科研院校都会有的，问问呗

huangcong1988

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! N! I, f1 l, f& p; r  k
- t3 {, u8 }8 g! ~6 J想问一下，您这个plat-e是哪里买的

Jonathan

回复 akxiaoqiang 的帖子5 @( k) u% w' y

: ^0 E3 J/ j( n3 `1 ^' Wplate-E一般用于包装鼠ips用的病毒，人一般都要用293T，然后要多加入一个包装质粒

zhangtcm

回复 Jonathan 的帖子  r* ~( `( S5 V. [, C  l/ j2 F9 Q

- \' P1 U" x# O# uGeneration of Human induced Pluripotent Stem Cells* x9 f4 D( }. Y; I: x
Center for iPS Cell Research and Application (CiRA)
5 O9 U5 o5 Y. kInstitute for Integrated Cell-Material Sciences (iCeMS)
7 x* q" e7 p( s! J& L4 c; F2 Y) `6 y! vKyoto University
) r7 r8 f% E) _2 P这篇文献是用plate-E来包装人ips用的病毒的，这篇文献也蛮经典的

zhangtcm

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! d2 p# g  s+ n3 f9 i9 y% [哈哈，plat-e哪儿有便宜买的，有消息了通知一下

Jonathan

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1 U5 o  \0 O2 ]% l' i
# Q) x4 U6 k1 y: y% F我们在GIBH的时候都是用293T。plate-E是用来包装鼠ips病毒的。当然也可以用来包装人的，只是效率低。据说是这个原因。你还可以用293FT，其实都差不多。呵呵。你可以去GIBH那边要一管