逆转录病毒包装

huangcong1988

前面做逆转录包装，看到文献中报道，以及别人的经验是目的基因：Gag/pol：VSVG的比例为10:9:1，还有一种比例是8:4:1，我不确定哪种更好，因为有人说VSVG对于293T细胞毒性很大，所以，大都倾向于用前一种，但是，我摸条件发现，三种质粒共转293T的时候，比例为8:4:1的时候荧光最强，那是否这个比例是最好的呢？

akxiaoqiang

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+ O( w6 B, p7 x& l
以前做过，不过用的是platE细胞去包病毒，用HBS和CaCl2，效率有80%-90%。

huangcong1988

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plat-e的话就不需要包装质粒了，直接转目的基因就Ok了，我这个需要三个质粒比例比较好。还有就是plat-e这个细胞哪里买的？

huangcong1988

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; q) T/ ^  [5 k& x- B
我之前一直在找这个细胞，找了好多地方，有的是没有，有的太贵了

akxiaoqiang

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1 v  I: D' `( v$ ^! F( }, ?2 `. j6 E是的，用这个细胞就不需要包装质粒，直接转。一些科研院校都会有的，问问呗

huangcong1988

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( m; V# h5 }: N# z0 Q7 F' ?7 X想问一下，您这个plat-e是哪里买的

Jonathan

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6 t: B( |! z) w: h2 |. X& B3 o$ B1 B' [
plate-E一般用于包装鼠ips用的病毒，人一般都要用293T，然后要多加入一个包装质粒

zhangtcm

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  H, O. @$ d0 I, U% V8 J
Generation of Human induced Pluripotent Stem Cells
* t$ l2 @0 Q. [  h: SCenter for iPS Cell Research and Application (CiRA)
& s, X2 \$ L8 j& k8 YInstitute for Integrated Cell-Material Sciences (iCeMS)
% k8 T+ L* j1 ?) Z8 sKyoto University
( k, B9 G% M  n' h, T' N这篇文献是用plate-E来包装人ips用的病毒的，这篇文献也蛮经典的

zhangtcm

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: h( Y/ I+ F) _/ T
. E1 V, m! f8 G; F5 @& {$ U0 e哈哈，plat-e哪儿有便宜买的，有消息了通知一下

Jonathan

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  E( x( H; r8 `1 _# i我们在GIBH的时候都是用293T。plate-E是用来包装鼠ips病毒的。当然也可以用来包装人的，只是效率低。据说是这个原因。你还可以用293FT，其实都差不多。呵呵。你可以去GIBH那边要一管