小鼠ES怎样才能无Feeder培养

cochongg

JM8怎样能在，
( ]/ Q! E, h2 M- b( N有明胶无Feeder的板上，" z. N7 R# [% H  C9 X
培养一到两代，5 j+ c5 B  \- Z$ p  s1 {2 L
分化尽可能少。
% g# ^9 f. b4 B% W. ?% @4 ?+ @- x" W+ R" R7 Q" N7 p
培养基添加LIF的浓度要加大吗？求具体方法。

zpzp0312

应该可以

cochongg

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$ o; G# _; ]3 u+ U+ L  e$ w* a; u; T) S" K
我尝试过，去除Feeder之后，Es细胞第二天就出现分化，不能形成之前的克隆团

sisi48

尝试用2i （2 inhibitor）吧

cochongg

回复 sisi48 的帖子' A- l" k3 q4 ^7 @# Q7 |$ k! F
9 i. k: S, W5 p$ J6 v( i: H
可否具体一点，，，，或者你是怎样做的，，，，提供一些数据参考

your1024

mark一下留个关注，也在考虑这个问题。

zpzp0312

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4 c3 W+ V) D3 r1 t0 u& ^- u# ^' q! S" n4 @& v4 q
我觉得可能是状态本身就不好
# X# Z: `9 `8 C) F在饲养层上，分化的细胞不易观察到，所以去除饲养层后就明显很多了9 f8 k8 i: D  X( _7 c# {
另外可以考虑使用一些现有的可以在无饲养层条件培养的细胞系
2 Y' v3 `5 D! E( Z! m按说JM8里面应该有适合无饲养层培养的

cochongg

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, b# A1 t+ B" H0 n, p' N5 F  z
1 o1 W% K) P6 d7 X/ Q转移到无Feeder之前JM8细胞状态很好，，，，因该说非常好，细胞团大小适中，边缘明亮，无重合。就是在无feeder的培养皿上，分化太严重。3 _8 R2 b- g8 I- x( b; u8 {
3 X2 @# t0 Y6 G: ?$ Q
另外补充一下：在无饲养层培养过程，连克隆团都形成不了。直接分化成纤维样细胞，贴壁，类似MSC

cochongg

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" m7 R; a# q: Q5 r& z6 d  ~2 n* Z# G; Z1 N4 \
如果你有做过的，请提供一下适合无feeder的JM8类型，还有培养条件（培养基添加哪类因子，以及浓度等）

cochongg

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: V) Y8 n% ], `  R3 I: i6 w; C, ^' h0 V0 A
请问你有尝试做过吗？？