浓度为0.1%的I型胶原酶的配制详细方法，高手请多指点

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大侠你好，“0.2微米滤器”你能不能介绍下它的详细资料和操作步骤。我上次就是直接用PBS溶的，结果15ml离心管里面呈现淡褐色的混悬液，也没有过滤就直接加进去了。怕是漏了重要的一步。

jkfly

PBS和培养基配都可以，我是PBS配的，时间我每次的时间比文献的短，37℃半个小时

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回复 jkfly 的帖子8 Y' |! ]0 ?: L/ P+ i

) f/ F# p# }4 j" N9 m, O  {( \- }0 v具体有没有就是消化到可以的时候，里面脂肪组织的一些客观的指证，比如像形态、色泽什么的一些就是消化完全的一些指正？另外是都需要过滤吗？37度是就单纯放置在培养箱还是恒温振荡？

zz091115

胶原酶保存条件是4度 别被楼上的给忽悠了 0.22um滤器过滤下 PBS也能配 但是主要考虑到在培养基配制时候细胞存活环境会更好一点

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+ O) s7 I2 c  n/ Q& y- f: f  Y2 E* u( Y; @
胶原酶不是在-20度保存吗？你说的保存条件是4度是说的配好后存放于4度冰箱吗？

jkfly

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2 i$ D- _6 L4 v" P3 ~- B6 J% i6 v" f我看国外protocol是要震荡的，我自己是15分钟去晃一下，放在培养箱里的，我觉得还是震荡的好

jkfly

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- ]! b; h) |7 o6 c
6 M3 e) k* B6 H& p4℃应该是粉剂，我们也是放在4℃的，配好后也是放4℃冰箱。一般用2周后再重新配。

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回复 jkfly 的帖子& R& W. Q! l7 i/ C2 n2 ?

8 }2 M8 H/ J+ C) k/ J啊 我就把粉剂放在-20了，配好分装后也是放在-20里面，那你说会不会受影响呢？0 F! s) u" `& d

dxldeyou_2006

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' f4 r8 {1 B# }; F100ml里0.1g

your1024

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! u; {4 ^8 [1 Y8 I- q4 [3 r/ d2 ~4 x* W/ i- v$ P7 y' L/ M# r5 p1 z
粉剂的配制是质量体积比，g/ml，所以0.1%就是0.1g的胶原酶配上100ml的液体，可以用PBS，也可以用含血清的培养基（Ⅰ型此法少见，主要用于Ⅱ型等消化较难消化的组织如软骨等，可消化过夜，并不用担心血清影响消化能力的问题）。配制时，可以分装到青霉素瓶里，不用的-20℃保存，用的时候拿出来37℃融化，尽快用完。消化时间40min~1h，观察大组织块消失，消化液呈糊状即可。