求助，hiPS诱导EB逐渐消散!

ligangtiancai

如题，我的hiPS在悬浮诱导EB后开始逐渐从边缘脱落，3天后基本上就全散开了，很是郁闷。。
  [( }0 [0 `7 ]1 w' o' Z7 n# g0 N& K9 [0 e# Z) U& r
问题如下：
" Q/ q- f9 B$ D2 k9 i     1 EB逐渐脱落散开的原因？
$ O$ O. T7 _# L. t& }     2 如果是支原体污染，如何检测和去除？2 ^; _" F. s$ P# {3 Z* `. I
   
) V6 b. v( o; o( H& J, P                   谢谢！

bio-bin

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) g5 v- W! [. L- |( b7 d, j. U  d5 Z! p9 u7 x* S1 A8 w
我也遇到同样的问题。我想请教一下，你用的EB培养液是什么?（DMEM/F12+20%K-SR+1%NEAA+1%Glu+2mM βME? 还是不用k-SR，加血清？)，另外你的hIPS形成EB前是维持在有饲养层上，还是在matrigel上？

ligangtiancai

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! }, Z- c- w0 j( P( ~做EB时用的是MEF的培养基， 高糖DMEM80%（PAA）+FBS（PAA）+1%NEAA+1%L-Glu。EB是悬浮培养的，接种前去除MEF

jefferson

建议换二楼说的培养基试下，不过用FBS替换KSR，即DMEM/F12+20%FBS+1%NEAA+1%Glu+2mM βME，也就是EB20培基。! o1 m6 n6 f* K# U. k/ h/ v

/ L7 G- j" P3 ?' d% F9 A另外，如果有支原体污染，直接丢吧，基本没办法去除的。即便加药，效果也不好。

ligangtiancai

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5 k9 W; w" o% x) \( u! G
( ]3 P2 d9 j) g/ o, D/ x恩，我试下，请问你用的FBS是什么牌子的，是否是ES-qualified的？谢谢

jefferson

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' y) T# m) l/ j7 D0 W; f9 ]' B' S0 I, u; A* W$ e8 K
GIBCO

echoxy1020

回复 jefferson 的帖子2 r& Z) w$ i& a2 H6 w+ w
  j9 \) p$ z7 T' q* q
请问一下为什么建议用FBS替换KSR？有什么区别吗？

wangxiang

支原体检测可以用PCR的方法，清楚推荐sigma的BM-CYCLIN。如果不是重要细胞，建议就直接扔掉吧，杀的周期较长。