为什么神经球吹打传代后，状态很差

jessewill

原代培养的神经球吹打50次之后，在显微镜下看球基本上被吹打成单细胞，48H之后产生一些细胞球，但是感觉球的状态非常差& @4 P) y3 p! K& e7 Z

) B8 G4 g, l- h" |' [0 ~8 ]* L1.球周围不圆润# g4 Q4 X8 w3 V. c/ w: z( ~
2.球的立体感不强，像很多细胞粘在一起，没有神经球的立体感: N# S3 n5 d# D

9 N( l3 w& Q: @% m6 ]3 M为什么会这样？我才传第二代啊，求解释

细胞海洋

建议上图

zpzp0312

聚集生长的细胞都会有这样的问题
+ U* L2 O: z) B) Y3 w6 j1 ], ~建议用机械法传代& E" O& L9 N" M# f: ^$ b( L
或者使用胶原酶多作用一段时间0 g5 ?4 }: n3 l
胶原酶比较温和

jojomayer

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! M7 ]$ R% \/ X, g2 X# x/ i+ U+ m; `& \# i- K: Q
请问您说的胶原酶是Accutase？

zpzp0312

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( F! [; L! m  E( m$ D) F1 g. G" _
是传统的胶原酶
' R  ?  Y& f, i$ i2 F  N5 g( a$ u, maccutase也是可以的，但作用似乎差一些，如果可以在消化后使用机械力choping也是可以的。
+ g( Q- q' w4 w. a# _' v- m: o; F通常来说accutase主要是作用于活力差的细胞类型。如果是单层生长的细胞效果比较明显
4 M2 \3 o8 V, X# P" e9 g你可以先用传统的胶原酶

ss安雅熙

我 的神经球 机械吹打根本不能成单细胞 我的原代培养密度10的6次方，4~5天就能传代 球很多 制备单细胞比较困难  但是消化成晓得团块即可 这样长起来的时间就会比较快 单细胞可能长的慢些

招财鼠

回复 ss安雅熙 的帖子0 F  b/ x" W# ^, q9 t: X
) v! _$ v. L. f$ U3 l! R
神经球打散传代以后可以成功进行贴壁培养吗。。。。？？？

xiangxiaoliang

神经球用Accutase 37度消化5min后，800rpm，3min 离心去掉accutase；再用加200ul完全培养基，用200ul枪头吹打20次；最后加800ul培养基，计数。一般48h后形成的球是跟你描述的差不多，五天左右球的形态就很正常了。