关于N2B27培养基德配置

随风的天使

请教大家，在胚胎干细胞培养时使用N2B27，如何配置培养基，请大侠指教！谢谢！

深海寂寞鱼

to 随风的天使 ：
" B2 X  L  ~! `7 t( {  V- e! G% e8 o% ?5 q$ F' P6 Z
     N2 (100x)  5ml/支, B27 (50x) 10ml/支, 直接加入到500ml的基础培养基里（比如，DMEM/F12）就可以了。
0 e8 }- e( K4 G4 k& z; \1 E: n! M: {% V6 _) c
     这样就是通常文献中所说的，1% N2 and 2% B27。
0 Y6 ^! V, ^2 l" t6 G9 a% r/ p/ S* Q0 l3 Y
     希望我说明白了。

随风的天使

回复 深海寂寞鱼 的帖子
5 K5 N  X3 ~- P# a6 j8 T
7 F6 b8 E* @8 M2 F4 V8 W谢谢你，我看很多文献还要加胰岛素等等很多东西，如果培养胚胎干细胞它只是临时的代替血清吗？其余的成分是否需要改变呀？谢谢你！

深海寂寞鱼

随风的天使 发表于 2011-1-13 09:36
- K9 q9 J) o' N回复 深海寂寞鱼 的帖子
" K4 a! H( S2 q( j: h* K+ V9 h" g6 a  Y9 A
谢谢你，我看很多文献还要加胰岛素等等很多东西，如果培养胚胎干细胞它只是临时的 ...

" `0 m! y' _2 C2 D/ k* @7 |% v6 wto 随风的天使：
( ]( @* ?" C. C0 U( [
% G9 a1 m# n" d3 Z3 t4 @! j, O  X' |    B27和N2就是用来替代血清的。血清的成分十分复杂，而B27和N2的成份是完全清楚的。
0 o3 ^, k& u0 l, A  Y4 V0 i3 ~8 v* J0 j+ y5 e' D4 Q) L, L$ F; V
    有关B27和N2的具体成份，请你参看论坛里的这个帖子：http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... 2B%B3%C9%B7%D6.html7 C5 Q* @9 M; ~5 b: J7 I8 y( ~4 m
* j; f. \8 s2 @0 X
    这样你也就可以知道，其实B27和N2里面是有胰岛素的。
  ]" F. _; f3 {; A4 x% J
- a$ p9 r2 y  H$ T- p) z/ [/ e3 d    我不知道你具体看的哪篇文献。你注意一下它是在加B27和N2以后又加了胰岛素吗？8 |) F3 e* Q2 n+ {/ l

3 Y5 w/ T$ t6 N# g6 c3 Q    如果是这样的话，那么它就是为了提高培养基里胰岛素的浓度。这样或许可以促进细胞的增殖。0 ]( f8 m) x2 n+ \' x8 V' M
% W3 J, h2 G, H. l
     当然也可能它是有选择性的加了B27里面的一些成份，所以加了胰岛素。
6 `# w0 n9 G' P' m
% A2 l3 }4 O. L3 x. a1 j     多比较几篇文献，你或许就能发现规律。# X* R6 |7 |+ Q6 E
/ z! X: A! h2 `8 _* P
     如果还有不明白的，欢迎继续讨论。

cicadacjk

如果你是按照Austin Smith他们的配方，则应该是
  ]% C1 [9 S" N9 k( @1/2 DMEM/F12 1/2 Neurobasal
$ s: R7 c4 A' E+0.5%N2 +1% B274 I3 N* P9 k8 j0 H3 \& i
这里是他们实验室的protocol
7 A3 H  L0 T+ s+ I) H我自己试验用Knockout DMEM/F12养，问题也不大6 |% j6 \8 W8 `0 n5 x" D4 R& e
4 i3 B4 B% D! _* D$ w8 Y

深海寂寞鱼

那你完全可以用他们实验室的配方。 Austin Smith的实验室的东西可信度很高。
2 P; i% u; k. g6 N8 _+ E# B5 `3 E7 ?! h1 j5 R% ?: [( H) b3 [$ C' T
你完全用Knockout DMEM/F12应该没问题。3 x# F8 O, f; F% e! I

: I2 Q& P, W2 j1 {0 ]你注意他把N2和B27的浓度减半了。0 m. q) y) [! `

- G" d/ v8 ^0 l* \$ f我觉得你就按你的方法做。只要实验结果是好的。 你发文章的时候就按你的方法写就行了。

安静的折腾

没有加bovine serum albumin fraction V吗
; G( q9 L0 v3 B9 a+ y3 n

weddy2009

N2B27 (200ml)  7 v. M  z4 ^9 E/ f4 Q/ |4 ]
Mix 100 ml DMEM/F12, 7 N# r) Z2 j9 t: n) |0 e0 X1 u; z0 G
100 ml Neurobasal medium,
) U5 B' F* K# x) v* G, O+ p% k1 ml N2 stock, 2 ml B27 supplement,
. [) b0 c1 ?- }2 y$ T5 N1 ml Glutamine, 200 µl β-Mercaptoethanol.7 u9 k* O  q0 t4 @3 A2 e% ~
我们实验室的protocol，很好用的

微笑ci

回复 weddy2009 的帖子9 b6 v6 a% @+ ?0 I& ^. o2 Y* y
6 B8 I" q0 ]" p- |- T. Z
你好，请问这个培养基是用来养hES 的吗？我怎么觉得像神经分化用的呢？

weddy2009

回复 微笑ci 的帖子
' f& {9 W9 {% h7 V8 l+ o
) b+ i  y& O. l楼上问的是N2B27的配方啊，我就指的是该配方，用来培养mES时的基础培养液