转染-筛选-病毒

sizhengliu

今天想到一个问题，我们一般制备病毒是“质粒转染-收毒-丢弃包装细胞”，可不可以在质粒转染后，筛选稳定的细胞，来持续合成和收集病毒呢？

l19rna

细胞都被病毒裂解了哪来的稳定株，除非你加个可诱导启动子之类的

bigchock

不可以。7 S5 c) ~' e, C
1.细胞裂解才能产生大量的病毒颗粒
0 S4 t* W9 R+ D- |; Q. x2.即使有稳定转染几率，一来包装的3-4种质粒也不可能按理想比例的同时稳定的表达。

Yedan

LZ说的是Adenovirus？这种病毒确实是收毒的时候要裂完细胞收的。' D9 G4 r- i0 U( A4 T
Retro的都是收上清的，那个时候细胞都裂掉了么？我孤陋寡闻了……: S, t9 H" @. z. s
Plat-E/A/G这类包装细胞不就是LZ说的稳转之后的细胞么

sizhengliu

回复 Yedan 的帖子4 M  ?8 O, Z) O! I1 k$ J
) u1 \4 O8 s& r6 q1 U8 D  j9 I
我说的是慢病毒。一般选293FT做包装细胞

sizhengliu

回复 bigchock 的帖子% p3 `+ V; r% l7 ^9 h% b. K
7 u7 x3 B" W8 u, g
慢病毒是收集上清液的，需要细胞裂解么？

Yedan

回复 sizhengliu 的帖子
, a7 K4 f$ y! \( X- q( \3 B/ w  F9 y1 I; J' x% q9 D
Lenti的我爱用293T包，LZ你的想法其实是很好的，因为每次转染3质粒太麻烦了。但是有个问题你考虑过么，每次包完毒的细胞都已经confluent，甚至都已经融合了，这样的细胞是没法继续要下去的.Plat包装系统其实就是符合你说的筛选稳定的细胞，可惜是retro的。

huangcong1988

如果细胞不破裂，慢病毒没法释放的，你再好好看看慢病毒包装的整个过程吧。质粒转染293T细胞以后，在293T细胞中形成构成病毒的RNA和蛋白外壳，然后宿主细胞（293T）裂解，释放慢病毒，然后我们才能收集病毒上清，所以说，经质粒转染收集病毒以后，细胞就已经裂解死亡，剩下的细胞，除非你这次收集病毒滴度很低，要么就是包毒能力差的细胞，所以转染后筛选收集细胞没用的

sizhengliu

回复 huangcong1988 的帖子/ i. }9 z% g9 s2 r" e* z- O! F
* ^, `- h7 V1 R% j1 U9 E
明白了，谢谢！

张也行

LZ提出这种想法可能也是觉得几个质粒共转染的方法有些麻烦吧。但是只所以这么做也是从安全的角度着想。以前的病毒生产方法确实很简单，但是却有包装出野生型病毒的可能，还是安全第一吧。