我的骨髓间充质干细胞怎么纯化不了呢？？有图片

imgaga

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2 b. C- x- s$ ~这张图有两种细胞，一种是颜色浅的，应该是骨髓间充质干细胞吧？一种是图片里颜色深点的，小点的细胞，是什么细胞呀？这两种细胞贴壁都很牢，也吹打不下来，我消化了5分钟。这样的话，细胞该怎么纯化呀？
7 w- U& J, P3 }0 H4 q8 R我养原代的时候，好像是5天首次换液，是不是时间长了，贴壁的细胞就不纯了？

Tonypan

可以做个流式，检测一下CD45和CD14表达。看看是不是单核巨噬细胞或者其他白细胞的污染。

wangfw

采用克隆杯法，在皿中找一处细胞生长较好，没有其他类型细胞地方，进行局部消化可达到纯化目的。

wangzhiqi86

采用Percoll或Ficoll淋巴分离液会好很多，混合液3000rmp离心30min后，吸取中间薄雾层，在加有α-MEM+10%FBS的培养瓶中培养，3-4天时首次换液，然后每2-3天更换一次培养基，一般两周左右能分离到比较纯的BMSC，我当时就是这么做的，CD44和CD29都能达到95%以上，几乎没有表达CD45、CD34

不苦的药

胰酶浓度是多少的，第几代啊

imgaga

回复 不苦的药 的帖子) k% ?; t/ u1 _% y$ O7 ~, [

2 N% Y% u5 \# l  |' ~0.25%胰酶，第一代细胞。

imgaga

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7 ?" A8 d% d: V' I$ L/ f: I! u* ?# x1 J
哦，下次试试你的方法，呵呵。我的细胞长的怎么这么难看呀？呵呵。。怎么张牙舞爪的？为何不是典型的长梭形呢？

imgaga

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& u! e  J8 ?* Z7 @: A2 J  U8 z4 \; S
如果是其他细胞污染，该怎么去除呀？

imgaga

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& l, I" h( L4 k# e0 k
谢谢您的点子，呵呵，我试试~~

Tonypan

回复 imgaga 的帖子) r$ J5 v& i2 {. E' x3 T
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不知道你们有没有用磁珠做分选的？
4 |9 v$ ^! X; c贴壁后消化下来的细胞用CD14 microbeads或CD45 microbeads做个去除分选。1 ^5 Z# X! w$ d' f
骨髓里面单核巨噬细胞会贴壁" D# X& ~  P6 O; n
可以试试这个方法。# K3 C( m) d6 w, X# g
能找到这个方法的参考文献Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells Ameliorate) K5 |& A4 ?  @' Y8 o
Autoimmune Enteropathy Independently of Regulatory T Cells
4 ^( M$ {/ s- k5 n" a( R' Xcell stemcell 上的文献