CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题

yanxm920

没有遇到过呢

木子小王令

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( i, S( k* y3 b  J& l. q% c! O' D
是的，感觉自己还是操作有问题。4 b, l& L0 g% ~; y4 D* F
是别人给的培养第九天的Tcell，我每孔取了3×105接的。因为以前慢病毒转染时候一般都是在转染时细胞汇合度达30~50%，所以这回转Tcell也想当然的沿用这个规律。; ]" R# s; n$ b0 |( e
3 {2 h& O. {' \" r8 ~
请问你是在Tcell初始分离后就开始用抗体刺激吗？是不是这个时期的Tcell活力比较高呢？（我之前用的Tcell是不是有点老了？）
9 U% f# k: H* K% l
1 c+ t9 S5 D/ p# d- u' K6 e% U铺板密度如果是10^6/ml，6孔板铺1ml就可以的吧？接种第二天做转染，然后24h后再换液？
6 [1 X/ ^7 r% H; a

riverdtang

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8 F. }* s9 @* a* u9 S( F) V" w1 n, I3 x5 p- C: J- J
是的，第九天转那效率肯定不会很高的，我们分离就刺激，浓度看你们所需的细胞种类和抗体质量了，这个需要摸索一下，不过你们可以长到第九天还有10%转染率，那刺激可能不是最大的问题，你可以试下分离2-3天转，可能会好些。悬浮细胞不需要铺板啊，直接转就是了，第二天换液。

木子小王令

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5 ^# s+ k$ p; y) C. x- p+ b6 H
恩恩！谢谢大神！
) l/ n$ P7 q8 I/ U我下次试着做个梯度，有问题还请多多指教！！！

ET生物人

回复 riverdtang 的帖子  n/ y9 ]7 }6 P
1 M4 A# ~+ W3 m  B+ @. Z2 U
你们是用什么培养液的？？怎么转染率这么高，我们感染效率一直都很不稳定。

六弦七品

回复 riverdtang 的帖子- S8 K$ Q/ m1 i% V& H1 A+ }

' V% l6 ~1 `) R. b. a+ J你们转染效率这么高，我们都用了RetroeNection加polybrene，还是没多少，应该是载体有问题，你们用的那种载体？

六弦七品

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! s. \" x0 Q* i+ C5 u/ W. F* M
. \) C# W+ q5 w8 Y2 |4 V用的CMV，最近准备换ef-1a

riverdtang

回复 六弦七品 的帖子# Q; B/ a/ w3 q! n! z, ?

7 Y4 A' U- Y5 i; |0 }5 T5 Y启动子试过没有什么明显的差别，还是转染时机影响吧，分离激活后尽早转会好些

jinhaifeng

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/ Q: N! h" y& h' Q请问你们用聚凝胺了吗

只因偶然

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  ]# o# v5 Q" j1 B2 N6 E0 P" q0 g* }: Q) l
你们测转染率是什么时候测的？为什么我们养的CAR-T，转染第5天后（转染第2天换液），细胞增殖速度变慢，活性下降了呢