提总RNA问题

pla269

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6 b" R% y( ~; M你用什么牌子的trizol

amosummer

靠经验的了。也可以来个摸索试验，不同体积试试，哪个效果好。

huangcong1988

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4 H' B/ `8 d0 R% v+ L
' J3 k/ n2 `* o0 |; `有国内的，也有国外的，国内比较便宜，进口的较贵，但是经验告诉我们，两到三微升足矣，多了浪费，少了又起不到抑制RNA酶活性的效果，无论国内还是进口，都行，两到三毫升，具体特殊情况具体再看，我看看牌子去。。。

huangcong1988

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+ w& P! a# [1 S) a( {6 {1 _
4 T/ e. s; @9 Y7 eScotland，UK的

endless-caas

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* `4 W4 {1 K/ _0 k3 T5 A  h
交流一下下，你们磨样用的是什么样的棒？是用的一次性的塑料的还是用的电动的铁棒的呢？其实对于磨样，我有时提的时候，就是看的经验，觉得差不多了就行了，但是，可能仅从眼观上看肯定是会有误差的，你们一般是以什么标准呢？磨样加液氮好还是不加好？如果加的话，一定要磨成粉吗？对于磨样过程中样品的飞贱你们怎么看待呢？

huangcong1988

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" w- n/ U) ^- B0 b7 t3 k1 n. Z/ x! g8 H5 @! L
你们磨的是植物组织还是动物组织？我们磨的是动物组织，用的是瓷棒，跟研钵一样的瓷的。
1 E5 i& l5 w5 T
& |$ E& H0 ]% B  u是啊，磨样多少一般都是凭经验，大概可以就行，一般就是绿豆粒那么大就行，其实黄豆粒大也行，主要是加入trizol的量有限，磨太多样不仅浪费体力，trizol对于RNA的抑制作用也不能正常发挥，所以还是尽量不要太多，用肉眼看，一般那个小勺三分之一就够。% b. ^; f$ |* y( h, P0 l% `
磨样肯定是要在液氮中磨的，取出样的时候也要把样放在液氮中，其实比较标准的磨样，整个过程都是在液氮中进行，所以边磨要不断加氮，不要使研钵中的氮干掉，还有开始要加氮到放有研磨棒的研钵中预冷。8 M- i3 T8 N% |) N8 s
这些都是个人经验，你们可以试试- L! o  u+ o7 R$ f$ K2 D
样品最好是磨得细一点比较好，那样提RNA的效果也好一点，而且尽量要缩短时间，因为时间一长，RNA肯定会降解，提的效果肯定受影响。
  Y5 v' \! ^2 S6 J磨样过程中样品飞溅，如果说样品比较多，溅出去的就不管了，反正提RNA要不了那么多样，如果捡到研钵中会使样品污染，还有就是由于磨样需要很大力气，所以在所难免会使得氮啊，样品粉末啊，混合液啊溅得到处都是，最好在磨样之前在台面上铺几层一次性PE手套，这样使得台面比较干净，而且铺手套有一定缓冲作用，不至于使台面受损。

chliu

我们用invitrogen的，只要少于说明书上的样品的量，一般用1ml。

endless-caas

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OK，你的经验给我提供了一定的参考价值。其实我们提的也是动物组织，大小也就像你说的豆粒般大，不过，你们用研钵磨这么小的样，我觉得很厉害。我们时常是直接在1.5的离心管里面磨，但是就是不好做到一边磨一边加液氮，一般也就加一点就磨了，磨完就放冰上。可能还是提得少，所以，我提的结果有时候就是不太好，呵呵，学习了噢！

pla269

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提成绿豆粒大，已经不小了，你有什么窍门吗3 J( t+ l" p) P5 w1 z- Q0 Q

huangcong1988

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2 _$ }0 b+ s7 p# R& X4 m( @7 U! f9 u' D" n9 Q7 @9 i
貌似这个没什么窍门，就是磨样呗，多了就少取点，一般样品是足够的，而且比较多，所以磨样的时候如果样品溅出来，没事的，放弃那一点，要不了那么多，主要是样品分开时候比较难，分开之后可以选择性的放弃磨一部分