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泡沫清风

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我先说一点：培养过程中，我没提到换液，说明就没有换液！一般细胞种上后我就放在那里不怎么去管他，等他长满了消化
( @& S3 |5 J8 ?因为有人问我这个问题，所以我先回答下，呵呵！

泡沫清风

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6 k# r+ k& C7 M/ g1 r7 Z" E* X8 h& p& K
have-a-rest 的问题：
0 L. F# w, j* g2 F1、我们的培养基买的是GIBCO的粉末，含丙酮酸钠4 y9 P5 A$ m2 I5 ?0 b
2、双抗加不加依个人习惯，我培养不会污染，所以就不加了！而且包装病毒和感染的时候最好不要加双抗
) ?$ h0 ^8 |8 V3 I+ x$ ]3、我们以前也用过胰酶+EDTA，感觉太强烈，不利于细胞下次贴壁，293T细胞本来就是贴壁不牢的细胞系，0.25%的胰酶消化已经够快了，有些protocol还建议用0.05%的胰酶。还有专家建议胰酶都不用，直接吹就行，我们也试过，吹完了细胞碎片很多，背景很脏。吹打时间长是因为293T比较粘连，容易抱团，充分吹打成单细胞！

泡沫清风

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% x* D8 K8 q5 [5 l1 X8 l) K- b( @hualin840518 的问题：
; a- f5 i/ P0 Q- z  u' q5 y/ bnikon的荧光显微镜自带的成像系统

泡沫清风

% d- u: S3 k0 N5 h: u6 ~
0 @+ ]1 m+ _- Q
mvirus008 的问题：- a$ W3 G2 z( c" `0 k
可以不离心，确实也有人这么做，虽然是中和了，但是仍有残留，我觉得不好！$ l/ c% w5 r; P4 ^, d
而且不离心细胞碎片可能会多，背景比较脏
! R( x% f+ H  O美国那边的老师都推荐离心。

泡沫清风

难得胡涂-1的问题
* E' c3 p% H* a293T贴壁本身就不牢固，你很难把握，稍微消化一会细胞就起来了！倒胰酶，容易倒掉细胞

gemstone

建议将0.25%的胰酶用PBS稀释1：4，然后对细胞的损伤会小很多，这个细胞很容易消化。转染也要特别小心，不小心就会漂的。

泡沫清风

6# gemstone
+ _. Z$ X% P+ K3 w3 a
" ], Q4 I% \* u$ i呵呵，我上面说了，也可以用0.05%的胰酶！
8 M5 z5 c; R; p; U# D转染我后面会说的，我铺了poly-L-lysine,所以不太会飘。而且就算不铺poly-L-lysine，我们的细胞还是比较牢固的，细胞比较好

wangming

比较过铺明胶和poly-L-lysine的效果吗？我用的是明胶，经常出现很多白色颗粒。

泡沫清风

8# wangming
9 w0 A0 C* V7 s  s  l  @" f- d2 T我没有用过GELATIN，GELATIN一般都是在培养ES时用于铺Feeder的吧。

sajia

我想问一个巨弱的问题：第一天和第二天的图片上黄色的圆圈是啥啊？还有怎么判断宝宝长的好呢？光看触角么？