请问大家冻细胞的时候是用冻存盒冻的吗？

jiuxuya

另外大家是怎么冻的？直接放冻存盒里放零下80度冰箱里，还是先放4度再放零下80度再放液氮呢？有没有比较标准的冻存方法？

吃呆猫

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冻存盒（泡沫盒也可以）可以直接放-80，不用的话就是梯度降温4度半小时，-20度2小时，最后放-80，一天后转液氮。干细胞冻存死的多存活率不高，小心操作。

jiuxuya

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! u+ u/ z/ }3 x. t. c/ R好的，多谢，请问怎样冻存可以死的少些呢？

ltickp

脐带干细胞 放入程序降温盒后（coolcell）后放-80℃；免疫细胞加bambanker后直接放-80℃
' }" ~( Y7 f! r没有设备的话就直接 4℃ 30min，-20℃ 2h，-80℃过夜，最后转液氮
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吃呆猫

回复 jiuxuya 的帖子& P7 z8 l: X: R. e' X, Q
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好的血清，冻存液9：1，你冻之前细胞的状态，复苏的时候快融，都很重要

jiuxuya

回复 吃呆猫 的帖子
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+ e# w9 f# ^2 P* k  M; n# f8 H请问如果血清我比如我用的是血清替代物已经和培养液进行融合了，那么含有血清的培养液和冻存液DMSO之间的比例是不是就是9:1？换句话说加9ml带血清的培养液再加1毫升DMSO即可？

jiuxuya

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9 O# H, @: u/ u9 _% \0 Q$ _5 P您好既然您说买好的外部冻存液那我问下，一般免疫细胞您冻存是按照冻存液什么密度冻的？5*10的8还是最大1*10的9？另外脐带的冻存是自己配置还是也用免疫细胞的冻存液呢？

卓俊文

预冷冻存盒（含异丙醇）直接-80冻存，第二天即可转液氮。没冻存盒用10层纱布包裹放-80第二天转液氮也ok。

jiuxuya

回复 卓俊文 的帖子! |8 z$ v4 g7 ~  h+ B

+ h* d( M& p- t* \" h' w+ q好的，谢谢，请问你们冻液氮的时候记录位置是怎么记录的？

吃呆猫

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. F8 v* B( @$ w) \! g" B( r- S1 _回复 jiuxuya 的帖子6 D% ?3 a( p5 T; w8 D
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纯血清（FBS）: DMSO=9:1