关于间充质干细胞纯度的问题，主演是CD105+的问题

gsg040222

最近培养的间充质，细胞纯度一直上不去，细胞形态也正常，但是就是CD105+的表达极低，甚至有时候都到10％左右，在培养皿中，细胞贴壁也挺好的的，就是用胰酶消化（0.03％-0.24％）细胞成团较为严重，离心速率为1200r，求解答啊

随时准备下线

应该把对照和同型对照图也贴上来。我觉得问题有二，1、胰酶浓度是不是有的低导致消化时间过长？2、是不是细胞培养老了，养过了？

qq417606285

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! X" v$ R4 @* ?5 r2 T8 k" p. v$ Z- w" J5 C! r! u
细胞成团脱落可能导致流式出问题，感觉你的胰酶浓度是不是过低导致消化时间太久了

baby00000003

从调机器换抗体做起吧～

gsg040222

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( P5 _5 O6 E, O* j) c* e关于胰酶，浓度我从0.03％到0.25％都试过，并且消化时间都在四十秒内。
' \) S+ m/ ~. l. s关于培养时间，上面这张图的细胞是48h，我觉得细胞应该没有养过。

gsg040222

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: b- d# M/ Z2 w* A4 j
& D$ ^. `: j3 b+ X; u胰酶浓度我从0.03％到0.25％都试过，并且消化时间都在四十秒内，时间很短，应该不存在消化时间过长的问题。

gsg040222

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但是期间有的细胞的CD105+的表达在99左右。。

fenglinzhu

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) V+ @! n* _' {4 U
, }7 V1 Z& P, I  u; Q5 N/ p: x# p如果你是冻存后复苏的细胞，建议你先传一代以后再跑流式。对比过冻存细胞直接流式，冻存细胞复苏后流式，冻存细胞复苏后传一代流式，结果又比较明显的差异。

随时准备下线

/ E1 t& A3 z% g3 f7 p' x

/ i: ?# @0 h; k2 B$ ^9 X. w" U回复 gsg040222 的帖子
! O' Z4 ]" g* V
9 n  @! _' }* r; ~" \我用0.1%的胰酶在1min内消化没问题，但是低于1%浓度的消化时间就会延长，而且细胞消化是成片掉下来，容易成絮状，再次传代的话，细胞长的不均匀，会长出来一些细胞堆积颗粒，颗粒附近的细胞形态容易改变，这个是我的经验

gsg040222

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/ P" k+ l# i7 `( R1 ?: q% P( W这个我是复苏完了做一次，传一代再做一次，传第二代再做一次，多个样本对比，都是105的问题。